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大鼠海馬神經元細胞的復蘇與傳代及凍存操作說明!

來源:北京百歐博偉生物技術有限公司   2025年05月28日 15:36  

大鼠海馬神經元細胞分離自海馬體;海馬體(Hippocampus),又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬,海馬體主要負責記憶和學習。海馬神經元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成,主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng),在學習、記憶、情緒反應及神經系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用,而且海馬組織是中樞神經系統(tǒng)內主要的神經干細胞聚集區(qū),具有高度序化板層結構和神經元相對獨立分布的特點,境界相對清晰,便于取材,因此,海馬神經元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究者當做理想的實驗模型。海馬神經元細胞培養(yǎng)是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,其在神經生物學,發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。

 

細胞簡介

平臺編號:Bio-129602

規(guī)格:1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞信息:RHNC

細胞名稱:大鼠海馬神經元細胞RHNC

產品規(guī)格:T25培養(yǎng)瓶x1;1.5ml凍存管x2

細胞數量:1x10^6;1x10^6

保存溫度:37℃;-198℃

運輸方式:常溫保溫運輸;干冰運輸

安全等級:1

用途限制:僅供科研2類

培養(yǎng)體系:神經元細胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)溫度:37℃

二氧化碳濃度:5%

簡介:大鼠海馬神經元細胞RHNC取自雄性SD大鼠,貼壁培養(yǎng)。

注釋:倍增時間41h

用途:細胞系

注意事項:僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產品信息以出庫為準)

 

細胞復蘇操作說明(針對凍存細胞)

實驗儀器:超凈工作臺 CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,水浴鍋 ,離心機

實驗試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,三抗

實驗材料:T25 細胞培養(yǎng)瓶 ,需復蘇的細胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管

實驗步驟:

1、從液氮罐中取出凍存管 ,直接浸入 37℃溫水中 ,并不時搖動令其盡快融化。

2、從 37℃水浴中取出凍存管 ,打開蓋子 ,移液槍吸出細胞懸液 ,加到離心管并滴加 5 倍以上培養(yǎng)基并混勻。

3、操作離心 , 調至 1000 轉/分 ,時長 10 分鐘

4、棄去上清液 ,重懸離心管底部細胞沉淀,在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 培養(yǎng)基 ,計數 ,調整細胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

5、次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

6、注意:凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中

 

細胞傳代操作說明(貼壁細胞)

實驗儀器:超凈工作臺 CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機

實驗試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗

實驗材料:T25 細胞培養(yǎng)瓶 ,需傳代的細胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管

實驗步驟:

1、細胞于培養(yǎng)箱中 ,愈合度達到 80% ,可進行傳代。

2、按 T25 培養(yǎng)瓶計 ,吸出培養(yǎng)基 ,并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ,添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ,消化 2min(具體時間視細胞而定),后用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。 1000r/min 離心 10 min ,棄上清 收集細胞,鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3、注意:消化時間不易過長,消化前血清成分務必去除干凈,終止消化請用新鮮培養(yǎng)基,原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用(終止消化或傳代)。

 

細胞傳代操作說明(懸浮細胞)

實驗儀器:超凈工作臺 CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機

實驗試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,三抗

實驗材料:T25 細胞培養(yǎng)瓶 ,需傳代的細胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管

實驗步驟:

1、細胞于培養(yǎng)箱中,密度達到懸浮細胞傳代標準(沉降后可鋪滿底面),可進行傳代。

2、按 T25 培養(yǎng)瓶計,吹打均勻,吸出培養(yǎng)基,1000r/min 離心 10 min,棄上清收集細胞,鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3、注意:原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用(傳代)。

 

細胞凍存操作說明

實驗儀器:超凈工作臺 CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機

實驗試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗 ,DMSO

實驗材料:T25 細胞培養(yǎng)瓶 ,需凍存的細胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管 ,凍存管 ,記號筆

實驗步驟:

1、取待凍存的細胞(按 T25 計 )用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ,用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ,棄上清收集細胞。 如果是懸浮生長的細胞 ,則可直接離心收集細胞。

2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。

3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。

4、凍存管在 4℃下存放 30 min ,轉放-20℃ 1.5~2 h ,再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(- 196℃) ,并登記。

 

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