定 義
支原體(Mycoplasma)又稱霉形體,是目前發現的最小、簡單的無細胞壁的原核生物,直徑大小0.1~0.3μm,該大小剛好介于細菌和病毒之間。其能通過濾膜且呈高度多形性,是哺乳動物細胞培養中相對常見且難以檢測的污染物。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱為支原體。
分 類
支原體(mycoplasma)是細菌中最小的一種微生物,在生物學分類中屬于柔膜菌門、柔膜菌綱,又分屬于不同目科屬。其中研究較多的支原體目、支原體科,主要包含支原體屬、脲原體屬兩個種屬。
圖1.支原體結構圖
常見形態
支原體有多種形態,有球形、桿形、絲狀、分支狀等,通??梢栽趻呙桦婄R和透射電鏡下進行觀察。細胞培養上清和細胞膜是比較適宜支原體生長的;寄生在細胞表面的支原體可以穿透宿主細胞膜。
圖2.支原體形態圖
污染的來源
主要為細胞培養液或其成分(如培養基原料、血清和其他試劑)、實驗室操作人員、細胞培養箱、液氮培養箱、空氣中的粒子和氣溶膠、抗生素的過度使用、密封不當的細胞培養物和污染了支原體的細胞等。
圖3.易受支原體污染的來源
常見的污染支原體種類
細胞培養中95%的支原體污染主要是由萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、口腔支原體、發酵支原體、人型支原體這6種常見支原體引起的。
表1.污染支原體種類
S/N | 支原體 | 主要來源 | 95%常見的細胞培養污染物 |
1 | Acholeplasma laidlawii 萊氏無膽甾原體 | 豬、牛、禽類、植物 | 是 |
2 | Mycoplasma arginini 精氨酸支原體 | 豬、牛、綿羊、山羊 | 是 |
3 | Mycoplasma hyorhinis 豬鼻支原體 | 豬 | 是 |
4 | Mycoplasma orale 口腔支原體 | 人 | 是 |
5 | Mycoplasma fermentans 發酵支原體 | 人 | 是 |
6 | Mycoplasma hominis* 人型支原體 | 人 | 是 |
7 | mycoplasma pneumoniae 肺炎支原體 | 人 | \ |
8 | Mycoplasma salivarium 唾液支原體 | 人 | \ |
9 | Mycoplasma bovis* 牛支原體 | 牛 | \ |
10 | Mycoplasma gallisepticum 雞毒支原體 | 禽類 | \ |
11 | Mycoplasma synoviae 滑液囊支原體 | 禽類 | \ |
12 | Spiroplasma citri 螺原體 | 植物 | \ |
污染的方式
支原體一般通過黏附在宿主上皮細胞表面,從而成為人類、動物和植物的寄生物,通過攝取宿主細胞的膽固醇等營養物質和/或代謝產生的毒素、過氧化氫等有毒物質危害人類和動植物,給細胞制劑和科研工作帶來負面影響。
污染的影響
保守估計常規細胞培養中支原體污染率為15~35%,支原體污染會對細胞內代謝或生化合成過程造成影響,雖不會明顯表現為造成細胞死亡,但卻會嚴重干擾實驗結果的可信度。
圖4 支原體污染的危害
預防先行
切斷污染源頭
嚴格檢測新引入細胞:所有新細胞株或原代分離細胞需通過支原體檢測(如qPCR或LAMP法),確保陰性后方可進入培養體系。
規范實驗操作:穿戴專用防護裝備,定期消毒超凈臺、移液器等設備,避免交叉污染。
環境管控:細胞房每周紫外線消毒,每月全面清潔并配合支原體預防試劑擦拭死角,維持無菌環境。
精準清除
高效去除污染
支原體去除試劑-MycAwayTM 支原體去除試劑(1000×)40607ES通過靶向支原體DNA快速起效,3天即可顯著改善污染。其低毒性設計不損傷宿主細胞,且操作簡便,僅需加入培養基孵育,廣譜覆蓋95%以上常見支原體類型(如豬鼻支原體、口腔支原體等)。產品特點如下:
去除顯著
支原體污染的細胞中,加入翌圣MycAway™ 支原體去除試劑(1000×),連續培養1周后,培養基顏色明顯緩解(支原體污染的細胞,培養基約1天就會變黃,)顯微鏡觀察細胞狀態,結果顯示細胞狀態明顯改善,細胞倍增時間恢復。
圖5.支原體去除前后細胞狀態比較
毒性低
針對無支原體污染的細胞,同時使用MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑及PBS處理細胞,24h后,分別使用CCK-8和細胞計數的方式對細胞活力和增殖進行檢測,結果顯示,MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑對細胞生長無顯著抑制作用,毒性低。
圖6.MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑細胞毒性測試結果
翌圣生物
支原體防控的全周期保障
為了構建支原體污染的全周期防控體系,翌圣生物科技以創新技術為核心,開發了覆蓋“檢測-清除-預防”三大維度的完整產品矩陣,為實驗室提供一站式解決方案:
精準檢測:支原體qPCR檢測試劑盒、LAMP等溫擴增試劑盒等,支持快速篩查與藥典級檢測,靈敏度達10 CFU/mL,滿足細胞治療產品快速放行需求。
靶向清除:MycAway™支原體去除試劑(細胞用)及環境專用消殺試劑,廣譜覆蓋95%以上污染支原體,3天高效起效,兼顧細胞安全性與操作便捷性。
長效防護:支原體預防試劑結合標準化操作流程,從新細胞準入、實驗環境管控到設備定期消殺,多節點阻斷污染傳播鏈。
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產品應用 | 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
支原體去除 | MycAway™Treatment(1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent(支原體去除試劑) | 40607ES | 100 μL/ 1mL / 5×1mL |
支原體預防 | MycAway™ Spray(Ready-to-use) 支原體噴霧劑(即用型) | 40605ES | 500mL / 2×500mL / 10×500mL |
MycAway 支原體預防試劑(2000×)細胞生物學 分離培養 | 40608ES | 1mL / 5×1mL | |
MycGuard™-1 Solution(100×),for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細胞培養箱水盤1號消毒衛士(支原體污染預防) | 40609ES | 100 mL | |
MycGuard™-2 Solution(500×),for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號消毒衛士(支原體污染預防) | 40610ES | 100 mL | |
支原體檢測 (一步法快檢) | MycAway™Plus-Color One - Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES | 25T / 100T |
支原體檢測 (PCR) | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES | 10 assays/20 assays |
支原體檢測(qPCR) | Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit支原體qPCR檢測試劑盒(探針法) | 40618ES | 25T / 100T |
MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit(2G) 支原體qPCR檢測試劑盒(探針法)(2G) | 40619ES | 25T / 100T |
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