BioProE細胞凍存液（不含蛋白、DMSO和血清）使用方法

BioProE細胞凍存液基于控冰凍存技術，由明確化學成分組成，不含有胎牛血清和動物源成分、DMSO、和其他蛋白質類物質。自主研發控冰保護成分能夠使細胞復蘇后存活率達到90%以上。目前已驗證的常用細胞系包括CHO、HEK 293、NS-1、5637、A549、HUH7、HepG2、VERO、MDCK、293T、marc-145、pk-15。也可用于常見原代細胞的冷凍保存。

細胞凍存步驟

1、常規方法收集對數生長期且細胞活率大于90%的貼壁細胞或懸浮細胞置于離心管中。

2、根據培養細胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細胞數。

3、將離心管放入離心機中以1,000rpm的轉速離心5分鐘。離心后吸棄上清液，保留細胞沉淀。

4、加入1-2mL的細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度約為 5×10⁵ -1×10⁷ /ml。輕柔地混勻細胞，制成細胞混合液。

5、分裝于已標記的凍存管中。

6、直接放入-80℃超低溫冰箱中，可保存一年。

7、如果想長期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時間，方可移至液氮罐中保存。

凍存細胞復蘇步驟

1、從-80℃冰箱或液氮中取出凍存的細胞，立即置于37℃水浴鍋中快速融化。

2、待凍存管中的細胞混合液wan全融化后轉移到無菌離心管中，立即加入等體積的細胞wan全培養基與細胞混合，1,000rpm離心5分鐘，移除上清液，收集細胞沉淀。

3、加入適量的wan全培養基，沿著管壁緩緩加入細胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細胞移至事先準備好的培養瓶中。

4、鏡檢觀察，待細胞狀態恢復后可進行其他研究或者培養處理。