液相色譜系統是一種在化學、生物、醫藥等諸多領域廣泛應用的重要分析工具,它主要由多個關鍵部分協同工作來實現對混合物中各成分的分離與分析,其核心原理基于樣品中不同組分在固定相和流動相之間的分配差異。當流動相攜帶樣品通過裝有固定相的色譜柱時,各組分與固定相和流動相的作用力不同,導致它們在柱中的遷移速度不同,從而實現分離。
液相色譜系統各流程之間的校準方法:
1.流速校準:
-稱重法:在一定的流速設置下,準確收集一段時間內流出的流動相,通過稱重計算實際流速。例如,以甲醇為流動相,按設定流量,待流速穩定后,在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相,同時用秒表計時,準確地收集10 -25分鐘,稱重后根據流動相的密度計算實際流速,與設定流速進行比較,偏差應在允許范圍內。
-儀器自帶校準功能:許多現代液相色譜儀具有自帶的流速校準程序,可按照儀器操作手冊中的說明進行操作,儀器會自動對流速進行校準和調整。
2.檢測器校準:
-波長校準(針對紫外 -可見檢測器等):使用合適的波長校準標準品,如鈥玻璃濾光片等,調整檢測器的波長,使其與標準品的特征吸收波長相符,以確保檢測器在不同波長下的準確性。
-靈敏度校準:使用標準液進樣,設置合理的流速和檢測器參數,調整檢測器增益,逐漸增大信號幅度,記錄增益值,并與儀器規格進行比較。
3.進樣器校準:
-對于手動進樣器,可使用微量注射器抽取已知體積的標準溶液,多次進樣,根據進樣后色譜峰的響應值計算實際進樣量,與理論進樣量進行比較,評估進樣器的準確性和重復性。
-對于自動進樣器,可通過設置不同的進樣量,連續多次進樣,檢查進樣量的準確度和精密度是否符合要求。同時,檢查進樣器的進樣順序、交叉污染等情況。
4.保留時間校準:
-使用含有多種組分的標準品溶液,通過比較標準品中各組分在液相色譜圖上的保留時間,對儀器進行校準。可在相同的色譜條件下,定期進樣標準品溶液,觀察保留時間的變化情況,若超出允許范圍,則需要進行調整。
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