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紫外可見分光光度計(jì)是分析化學(xué)中常用的精密儀器，用于測定樣品對紫外-可見波段(200-800 nm)光的吸收特性。其操作涉及光學(xué)系統(tǒng)、電子元件和化學(xué)樣品的協(xié)同配合，需嚴(yán)格遵循規(guī)范流程以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和儀器穩(wěn)定性。以下是其使用細(xì)節(jié)的系統(tǒng)性總結(jié)：
一、開機(jī)前準(zhǔn)備
1. 環(huán)境檢查
- 儀器需放置在平穩(wěn)臺面，避免振動(dòng)和強(qiáng)磁場干擾。
- 室溫建議控制在15-25℃，濕度低于60%，防止光學(xué)元件受潮或結(jié)露。
- 避免陽光直射或強(qiáng)光照射，關(guān)閉儀器周圍其他光源。
2. 儀器狀態(tài)確認(rèn)
- 檢查電源電壓是否符合要求(通常為220V±5%)。
- 清理樣品室，確保無殘留液體或固體雜質(zhì)。
- 檢查比色皿是否清潔干燥，石英皿(用于紫外區(qū))和玻璃皿(用于可見區(qū))需分類放置。
二、開機(jī)與預(yù)熱
1. 啟動(dòng)程序
- 打開主機(jī)電源，啟動(dòng)配套軟件(如配備電腦控制)。
- 部分儀器需單獨(dú)開啟氘燈(紫外光源)和鎢燈(可見光源)，注意點(diǎn)亮順序(通常先開氘燈，后開鎢燈)。
2. 預(yù)熱與校準(zhǔn)
- 預(yù)熱：開機(jī)后需預(yù)熱15-30分鐘，使光源穩(wěn)定、電子系統(tǒng)達(dá)到熱平衡。
- 波長校準(zhǔn)：
- 紫外區(qū)(200-400 nm)：使用鈥玻璃(Hollow Cathode Lamp, HCL)的標(biāo)準(zhǔn)特征峰(如279.5 nm、365.0 nm)校準(zhǔn)。
- 可見區(qū)(400-800 nm)：使用鐠釹濾光片(Pr-Nd Glass)校準(zhǔn)，特征峰為585 nm和800 nm。
- 校準(zhǔn)時(shí)需將參比溶液(如蒸餾水或空白溶劑)置于樣品池，調(diào)整波長至標(biāo)準(zhǔn)峰位，誤差應(yīng)小于±0.5 nm。
三、樣品制備與裝載
1. 比色皿選擇與處理
- 紫外區(qū)(200-400 nm)：必須使用石英比色皿，避免玻璃對紫外光的吸收干擾。
- 可見區(qū)(400-800 nm)：可使用普通玻璃比色皿。
- 清潔方法：
- 石英皿：用1:1硝酸浸泡24小時(shí)，清水沖洗后用超純水潤洗，再用無水乙醇擦拭，晾干或氮?dú)獯蹈伞?/div>
- 玻璃皿：用洗滌劑清洗，清水沖凈后擦干。
- 注意：手持比色皿時(shí)，僅觸摸兩側(cè)毛面，避免指紋或油污附著透光面。
2. 樣品加載
- 液體樣品需倒入比色皿至約2/3高度，避免過滿溢出。
- 固體樣品需配制成均勻懸濁液或溶解液，離心后取上清液測試。
- 裝樣后用鏡頭紙輕拭外部水漬，保持透光面清潔。
四、測量參數(shù)設(shè)置
1. 波長范圍與帶寬
- 根據(jù)樣品特性選擇掃描范圍(如核酸測260 nm，蛋白質(zhì)測280 nm)。
- 帶寬設(shè)置需平衡靈敏度與分辨率：
- 窄帶寬(0.1-1 nm)：適用于精細(xì)光譜分析(如峰值定位)。
- 寬帶寬(2-5 nm)：用于快速掃描或低濃度樣品。
2. 基線校正
- 以空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液)為參比，調(diào)零(調(diào)節(jié)透射率為100%或吸光度為0)。
- 若樣品信號較弱，可啟用“暗電流校正”功能，消除檢測器噪聲。
3. 掃描模式與速度
- 定量分析：固定波長下測量吸光度(A)。
- 定性分析：全波長掃描(如200-800 nm)，掃描速度建議設(shè)為中速(如200 nm/min)，避免過快導(dǎo)致信號失真。
五、測量操作要點(diǎn)
1. 比色皿定位
- 放入樣品池時(shí)，確保比色皿標(biāo)記對準(zhǔn)光路方向(部分儀器需固定透光方向)。
- 多樣品測試時(shí)，按濃度梯度從低到高依次測量，避免高濃度樣品殘留影響低濃度結(jié)果。
2. 數(shù)據(jù)記錄
- 記錄吸光度(A)、透射率(T%)、波長(λ)及測試日期、樣品名稱等信息。
- 重復(fù)測量3次取平均值，RSD(相對標(biāo)準(zhǔn)偏差)應(yīng)小于1%。
3. 異常處理
- 若吸光度超出線性范圍(A>1.5或A<0.01)，需稀釋或濃縮樣品后重新測試。
- 基線漂移時(shí)，檢查光源強(qiáng)度(氘燈/鎢燈是否老化)、比色皿是否污染或參比溶液是否失效。
六、關(guān)機(jī)與維護(hù)
1. 關(guān)機(jī)步驟
- 先關(guān)閉氘燈和鎢燈，待散熱風(fēng)扇停止后關(guān)閉主機(jī)電源。
- 拔下電源插頭，蓋好防塵罩。
2. 日常維護(hù)
- 每次使用后清潔樣品室，定期用無水乙醇擦拭光源窗口和檢測器窗口。
- 每月檢查氘燈使用時(shí)長(通常壽命為1000-2000小時(shí))，及時(shí)更換老化燈泡。
- 每季度校準(zhǔn)波長和吸光度準(zhǔn)確性，使用標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀溶液)。
3. 長期存放
- 儀器內(nèi)放置干燥劑，避免光學(xué)元件受潮霉變。
- 切斷電源，罩上防塵布，存放于陰涼干燥處。
七、安全注意事項(xiàng)
1. 避免直視光源，尤其是紫外光，需佩戴防護(hù)眼鏡。
2. 測試揮發(fā)性、腐蝕性或有毒樣品時(shí)，應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，并戴手套。
3. 比色皿清洗廢液需按實(shí)驗(yàn)室規(guī)范處理，禁止隨意傾倒。
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