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軍團菌屬的培養特性與生化反應及微生物學檢驗!

來源:北京百歐博偉生物技術有限公司   2025年05月14日 15:44  

百歐博偉生物:伯杰系統細菌學手冊將其定為軍團菌科,軍團菌屬。該菌屬較為復雜,時有新種發現,現已命名的菌種分別來自人體和環境,共有39種及3個亞種,64個血清型。模式菌是嗜肺軍團菌。

 

1、細菌特性

 

1)形態染色  

 

革蘭陰性桿菌,無芽胞,無莢膜,有端鞭毛或側鞭毛,動力陽性。

 

2)培養特性  

 

能在細胞內生長繁殖,專性需氧,同時生長環境中還需2.5%~5%的二氧化碳;其生長的pH范圍較窄,pH6.4~7.2,在pH1.7時則死亡;生長溫度35℃,可生長的溫度范圍為25℃~42℃,在外環境中甚至水溫達63℃時亦可分離到本菌;營養要求苛刻,普通培養基、血平板和巧克力平板均不生長,生長過程中需要多種微量元素作為酶的協同因子或在代謝中起重要作用,同時需要氨基酸,以甲硫氨酸和半胱氨酸重要。生長緩慢,固體培養基在培養48h左右,在濃密涂種處可見生長。

 

不同培養基上菌落的形成和表現不同,目前的培基是緩沖活性炭酵母浸出液,加上鐵、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸(在不含L-半胱氨酸的BCYE和血平板上不生長),稱之為BCYEa(buffered charcoal-yeast extract agar)培養基。

 

3)生化反應  

 

生化反應可作為鑒定時的參考,大多數菌種能產生β內酰胺酶和液化明膠、水解淀粉,觸酶陽性,氧化酶弱陽性;硝酸鹽還原、尿素酶和碳水化合物利用反應都是陰性;所有嗜肺軍團菌血清型(血清型4和15除外)的各個菌株均具有的水解馬尿酸鹽的作用,而其他軍團菌則陰性。

 

4)抵抗力  

 

軍團菌已成為天然水環境中常在的一大類菌群,嗜肺軍團菌的生存能力較強,在含有藻類物質的氣溶膠中可長期存活,對紫外線敏感,對熱和常用的化學消毒劑敏感。

 

2、臨床意義

 

軍團病在世界各地均有發病,但主要在經濟發達國家流行,國內多屬散發報道。本菌廣泛存在于土壤及自然和人工的水環境中,尤其是在空調冷凝水中的檢出率。大多數(85%)是嗜肺軍團菌引起的,其中嗜肺軍團菌1血清型和6血清型占75%。高發于夏秋季,細菌通過空氣傳播,易侵犯患有慢性器質性疾病或免疫功能低下的患者,見的是肺炎型。

 

3、微生物學檢驗

 

1)檢驗程序。

 

2)標本采集  

 

標本應小心收集避免氣溶膠的形成,于收集后兩小時內用無菌防漏容器在環境溫度下小心送到實驗室。

 

1)適用的標本主要包括  咳出的痰、用支氣管鏡收集的材料、經氣管吸出物、胸腔積液和血液等。除胸水和血液外,其他標本中均混有正常菌群及其他病原菌,正常菌群對軍團菌有殺滅作用,取材后應及時分離培養,并使用加抗生素的選擇培養基。

 

2)病理組織標本  如閉合或開放的肺活檢材料、尸體標本及實驗動物的肝、脾等標本必須制成懸液,再進行涂片和分離培養。

 

3)環境污染標本  如水、土壤等,水標本應先濃縮再接種,土壤標本加入水中振蕩30min取水樣,參照水標本處理。

 

3)檢驗方法

 

1)顯微鏡檢查  標本直接涂片革蘭染色,意義不大。

 

2)分離培養  本菌營養要求苛刻,生長緩慢,在35℃~37℃,相對濕度70%~80%,2.5%~5.0%CO2環境下,BCYE培養基上培養2~5d可形成直徑1~2mm有光澤的菌落,在F-G(Feeley-Garman)瓊脂培養基上,培養3~5d可見針尖大小的菌落,在紫外線照射下可產生熒光。標本如在血平板、巧克力平板上生長或在BCYE或F-G平板上24h生長,則不是軍團菌。臨床標本如有污染,可在培養基中加入對軍團菌無抑制作用的抗生素如頭孢噻吩4μg/ml、多粘菌素E16U/ml、萬古霉素0.5μg/ml。

 

3)鑒定  在血平板、巧克力平板及不含L半胱氨酸的BCYE平板上不生長,而在含有L半胱氨酸的BCYE和F-G培養基上生長緩慢、形成典型菌落;革蘭陰性小桿菌,有顯著的多形性,均應懷疑為軍團菌。對可疑菌株可作直接熒光抗體染色等血清學鑒定和生化反應,必要時作細菌脂肪酸的氣液相色譜分析和DNA雜交、PCR試驗。

 

4)免疫學檢測  檢測軍團菌血清抗體的方法主要有間接免疫熒光染色(IFA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及放射免疫測定等,其中以IFA在臨床應用最多。急性期和恢復期雙份血清抗體效價增加4倍以上并達≥1:128或單份血清抗體效價達到或超過1:256為陽性。本法取恢復期血清需時較久(1~3個月),且可能與其他細菌的抗體起交叉反應。

 

5)核酸檢測  是快速特異方法,常用DNA探針和PCR方法檢測軍團菌rRNA,可用于軍團菌的快速診斷。

 

4)耐藥性

 

軍團菌體外抗生素敏感性試驗尚無統一標準,且與臨床治療反應不一致,因此,并不主張對醫院診斷實驗室分離的軍團菌進行體外抗生素敏感性試驗。目前已取得明顯臨床效果的抗菌藥物主要是大環內酯類藥物、利福平、氟喹諾酮類藥物,其次是四環素類。青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷類抗生素治療本菌無效。

 

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