在干細胞研究和應用中,細胞消化是細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵步驟之一。傳統(tǒng)的胰酶/EDTA 消化液雖然廣泛使用,但存在諸多問題,如消化過程劇烈、易導致細胞損傷和分化等。亞科因(Abbkine)生物技術(shù)有限公司推出的溫和型干細胞消化液,專為干細胞消化設(shè)計,能夠有效解決這些問題,為干細胞培養(yǎng)提供更溫和、更有效的解決方案。
一、溫和型干細胞消化液的創(chuàng)新優(yōu)勢
1. 無動物源性,安全性更高
溫和型干細胞消化液采用重組胰酶生產(chǎn),不使用任何動物源性原料。這一特性使得該消化液在生產(chǎn)過程中避免了動物源性病毒污染的風險,特別適用于對無動物源性有嚴格要求的干細胞消化。在干細胞治療研究中,使用無動物源性消化液能夠顯著降低潛在的生物安全風險,確保細胞的純凈性和安全性。
2. 溫和消化,減少細胞損傷
與傳統(tǒng)胰酶消化液相比,溫和型干細胞消化液在消化過程中對細胞的損傷更小。它能夠溫和地分離細胞,避免因劇烈消化導致的細胞老化和分化。這種溫和的消化方式顯著提高了細胞的存活率,減少了因過度消化對細胞后期傳代帶來的不利影響。在干細胞培養(yǎng)中,保持細胞的生物學特性至關(guān)重要,溫和型干細胞消化液能夠有效維持細胞的增殖能力和分化潛能。
3. 即用型設(shè)計,操作簡便
溫和型干細胞消化液為即用型產(chǎn)品,無需額外配制或稀釋,直接使用即可。這種設(shè)計大大簡化了操作步驟,減少了因配制不當導致的實驗誤差。同時,該消化液經(jīng)過嚴格的過濾除菌處理,確保無菌性,使用過程中無需額外滅菌步驟,進一步提高了實驗的便捷性和可靠性。
二、溫和型干細胞消化液的技術(shù)參數(shù)
1. 成分與配方
溫和型干細胞消化液含有重組胰酶和 EDTA,能夠有效分解細胞間的連接蛋白,使細胞從培養(yǎng)基質(zhì)上脫落。該消化液不含酚紅,避免了酚紅對細胞生長和實驗結(jié)果的潛在干擾。其 pH 值為 7.2 - 7.4,接近細胞培養(yǎng)環(huán)境的生理 pH 值,能夠為細胞提供一個溫和的消化環(huán)境。
2. 消化效果
該消化液對干細胞的消化優(yōu)于傳統(tǒng)胰酶消化液。它能夠在較短的時間內(nèi)完成細胞的消化,同時保持細胞的完整性和活性。實驗表明,使用溫和型干細胞消化液處理后的細胞,其存活率和傳代成功率顯著提高,細胞形態(tài)和功能也更加穩(wěn)定。
3. 適用范圍
溫和型干細胞消化液不僅適用于干細胞的消化,還適用于其他貼壁培養(yǎng)的哺乳動物細胞。其溫和的消化特性使其在多種細胞類型中表現(xiàn)出色,能夠有效減少細胞損傷,提高細胞的培養(yǎng)質(zhì)量。
三、溫和型干細胞消化液的操作使用
1. 消化前準備
在使用溫和型干細胞消化液之前,確保細胞培養(yǎng)環(huán)境的清潔和無菌。將消化液從冰箱中取出,使其恢復至室溫。使用前輕輕搖勻消化液,確保成分均勻分布。
2. 消化過程
將培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基吸出,用適量的 PBS 或無菌生理鹽水輕輕沖洗細胞,去除殘留的培養(yǎng)基成分。然后加入適量的溫和型干細胞消化液,覆蓋細胞表面。將培養(yǎng)瓶放入細胞培養(yǎng)箱中,設(shè)置溫度為 37℃,二氧化碳濃度為 5% 左右,消化時間一般為 3 - 5 分鐘。消化過程中,定期觀察細胞形態(tài),當細胞開始變圓并從培養(yǎng)瓶表面脫落時,即可終止消化。
3. 終止消化
消化完成后,迅速加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞,終止消化過程。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,以 1000 rpm 的速度離心 5 分鐘,棄去上清液,用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞,調(diào)整細胞密度后進行后續(xù)的傳代培養(yǎng)。
4. 注意事項
使用溫和型干細胞消化液時,需注意消化時間的控制。消化時間過長可能導致細胞損傷,而消化時間過短則可能無法全部分離細胞。建議根據(jù)細胞類型和實驗需求進行預實驗,優(yōu)化消化時間。同時,避免消化液長時間暴露在空氣中,以免影響其活性。
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