試劑簡介
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅(紅色)是用于標記和檢測活細胞細胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無熒光,具有細胞膜滲透性。
一旦進入細胞后,被細胞內酯酶水解為鈣黃綠素紅(Calcein Red),能與胞內鈣離子結合,產生強烈的紅色熒光(Ex/Em=560/574),用標準的TRITC/Cy3濾片設置檢測。
Calcein Red AM對濕度敏感,粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存,且須緊緊密封蓋子,干燥保存。Calcein Red AM工作液須現配現用。
試劑信息
同義名:Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅乙酰甲酯;
分子量:1015.79
純度:≥95%(HPLC)
Ex/Em:560/574nm
溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
儲存條件:-20℃避光干燥
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅染色步驟
大多數實驗中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。
由于不同細胞系的染色條件不同,初次實驗建議做梯度實驗,以確定Calcein Red AM的工作濃度,使用低探針濃度得到的熒光結果為篩選原則。
(1)取一管適量分裝的儲存液(1000×)置于室溫,至少回溫20min,低速離心后,用合適的緩沖液如PBS,HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。
(2)對于貼壁細胞,先用胰酶-EDTA消化細胞,離心收集細胞(1000 rpm,3min)。對于懸浮細胞,直接離心收集細胞。
(3)去上清,用緩沖液清洗細胞2~3次,充分去除殘留的酯酶活性。
(4)用1/10細胞培養基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細胞,37℃孵育20min~1h。
(5)用PBS(或者其他緩沖液)洗滌細胞兩次去除多余染料。
(6)用含合適濾光片(Ex/Em= 560nm/574nm)的儀器進行檢測。
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