是否每一個細胞都有特定的參數?
不是。即使是同一個細胞,電轉實際上也沒有單一的參數,需要根據實驗需要的細胞密度以及溫度和DNA情況加以預先測試。
另外,同樣的細胞在不同的實驗室培養條件下可能需要不同的參數,因此本網站有推薦參數供客戶參考。對于沒有推薦參數的細胞,可以選擇類似直徑的細胞參數進行測試。
為什么每次同樣的細胞進行電轉,有的時候結果不一樣?
很多客戶在剛剛接觸電轉實驗的時候都會遇到這個問題,因為影響電轉效果的因素有很多,比如:細胞密度、溫度、DNA質量等。我們都會建議客戶在首次做一個新的細胞電轉時可以從推薦的參數出發來做個簡單GFP測試找到合適的參數。
初次實驗建議按照推薦電壓上下隔20V測試,盡量把預先測試的實驗條件控制得與正式實驗一致,比如測試的時候細胞密度、培養方式、質粒用量等。另外,同樣的細胞在不同的實驗室培養條件下可能需要不同的參數,因此推薦參數僅供參考。通常GFP熒光在電轉1-3個小時后可通過顯微鏡進行觀察,過夜培養后熒光表達更強。
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