CHO細胞是一種常用的哺乳動物細胞系,廣泛用于基因表達、生物制藥和疫苗生產等領域。CHO細胞培養需要使用一定的培養基,下面將介紹CHO細胞培養基的使用方法。
1、購買培養基
可以從許多商家或供應商處購買。選擇合適的培養基要考慮到您的實驗目的、細胞株、培養條件和質量要求等方面。一般來說,培養基包含基礎培養液和添加劑兩部分,其中添加劑如血清、激素、生長因子等對細胞的生長和增殖起著重要作用。
2、準備培養器材
在進行CHO細胞培養之前,必須準備好培養器材,包括無菌培養皿、移液器、離心管、吸管、顯微鏡、緩沖液和消毒液等。
3、去除凍存細胞
如果您正在使用凍存CHO細胞,請先將細胞恢復。將凍存管放入37℃預熱的水浴中,輕輕搖動,待至融化后,將細胞轉移到無菌離心管中。用無菌緩沖液洗滌細胞兩次,離心去除媒介液。
4、細胞傳代
CHO細胞會隨著時間的推移而逐漸老化,需要定期傳代。當細胞在培養皿中達到一定密度時,可以進行細胞傳代。首先用PBS或緩沖液清洗細胞,然后加入消化酶(如胰酶)和牛血清或其他消化劑,使細胞與培養皿分離。接下來,將細胞轉移到新的無菌培養皿中,并加入新鮮培養基。
5、培養條件
CHO細胞需要在特定的培養條件下生長,這些條件包括適當的溫度、CO2濃度、氧氣水平和培養基pH值等。一般來說,CHO細胞在37℃下、5% CO2和95%濕度的環境中生長較為適宜。
6、培養過程中的檢測
在培養CHO細胞的過程中,要對細胞密度、細胞形態和細胞健康狀況進行定期檢測。可以觀察細胞在顯微鏡下的形態特征、顏色和微粒污染等。此外,也可以使用染色試劑、PCR和ELISA等方法檢測細胞的生長狀態和表達水平。
總之,CHO細胞培養是一項相對復雜的實驗技術,需要嚴格控制培養條件和操作過程中的無菌性。通過上述步驟可使CHO細胞在培養基中獲得良好的生長和表達效果。
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