革蘭氏染色方法基于某些細菌細胞壁中肽聚糖之間的反應(yīng)。
革蘭氏染色包括給:細菌染色,用染劑固定顏色,使細胞脫色,并進行復(fù)染。
①結(jié)晶紫與肽聚糖結(jié)合,將細胞染成紫色。
革蘭氏陽性細胞和革蘭氏陰性細胞的細胞壁中都含有肽聚糖,
所以最初,所有細菌都會染成紫色。
②碘和碘化鉀用作染色劑或固定劑。
革蘭氏陽性細胞形成結(jié)晶紫碘復(fù)合物。
③用酒精或丙酮使細胞脫色。
革蘭氏陰性細菌的細胞壁中的肽聚糖要少得多,因此這一步驟基本上使其無色,
而革蘭氏陽性細胞中只有一些顏色被去除,這些細胞含有更多的肽聚糖(細胞壁的60-90%)。
革蘭氏陽性細胞的厚細胞壁在脫色步驟中脫水,導(dǎo)致細胞收縮,并將染色碘復(fù)合物滯留在細胞內(nèi)。
4. 脫色步驟后,應(yīng)用復(fù)染(通常是藏紅,但有時是紫紅色)將細菌染成粉紅色。
革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都會染上粉紅色的污漬,但在革蘭氏陽菌的深紫色上看不到。
如果正確執(zhí)行染色程序,革蘭氏陽性菌將為紫色,而革蘭氏陰性菌將為粉紅色。
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