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細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中最常見(jiàn)又必須掌握的一門技術(shù)，看似簡(jiǎn)單，然而卻經(jīng)常遇到如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，結(jié)果就是只能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。所以在進(jìn)行細(xì)胞鋪板的時(shí)候應(yīng)該注意哪些事情。
細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化
從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來(lái)說(shuō)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測(cè)細(xì)胞半抑制率(IC50)測(cè)試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度；另外還可一次性測(cè)多個(gè)藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。
收集細(xì)胞要混勻
消化后的細(xì)胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開(kāi)，最好是單個(gè)的狀態(tài)，但同時(shí)又不能損傷細(xì)胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán)！然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)去！一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細(xì)胞吹起，細(xì)胞要像云霧一樣散開(kāi)，這樣易于形成單細(xì)胞。象下圖所示的這種移液器就非常好用。
接種細(xì)胞須小心
鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個(gè)孔里面加1mL的培養(yǎng)基，晃動(dòng)使之鋪勻整個(gè)孔底，然后加入1 mL的細(xì)胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。
輕輕敲打勿抱團(tuán)
細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對(duì)著燈光，從底部往上看，看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán)。如果有抱團(tuán)的話，用手指從底部輕輕敲打，使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯(cuò)。參數(shù)要設(shè)置成振幅小而頻率高。
十字交叉要水平
觀察和敲打后放入培養(yǎng)箱，然后畫(huà)“十字”，就是把細(xì)胞培養(yǎng)板貼著培養(yǎng)箱擱板，前后方向來(lái)回晃動(dòng)10次，再左右方向晃動(dòng)10次，正好是一個(gè)“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養(yǎng)箱擱板上，沒(méi)事不要去動(dòng)它。這里要注意的是，托架應(yīng)該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養(yǎng)箱的擱板要水平校正，盡量地做到水平。擱板會(huì)向一個(gè)方向傾斜，對(duì)于貼壁時(shí)間長(zhǎng)的細(xì)胞，就算當(dāng)時(shí)混勻了，放進(jìn)培養(yǎng)箱后也搖勻了，但是重力作用下細(xì)胞也會(huì)向一側(cè)聚集。 培養(yǎng)箱里面或者外面盡量不要放可以產(chǎn)生振動(dòng)的儀器，比如蠕動(dòng)泵、離心機(jī)、渦旋器一類的儀器。這些儀器產(chǎn)生的振動(dòng)對(duì)細(xì)胞貼壁有影響，也可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞貼壁不均勻。
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