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如何核算c18反相色譜柱的柱效率？
c18反相色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。
長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復(fù)雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。
c18反相色譜柱的柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會導(dǎo)致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。
因此對于復(fù)雜樣品需要精確分離，必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用最常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
c18反相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序，可能還有一些運(yùn)氣。一般使用高壓勻漿方法裝填，也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實(shí)，這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力。壓力太大，顆粒破碎，壓力太小，塔板數(shù)少。同時壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均，拖尾嚴(yán)重。同時還有頭上平整程度。套上套，就可以用了。
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