細胞凍存技術作為一種保存細胞的有效方法,在生物學領域已有深入廣泛的應用。因為正常情況下,直接冷凍細胞會產生冰晶對細胞造成傷害,從而導致細胞死亡。所以需要通過添加冷凍保護劑配制細胞凍存液,來保護細胞。
凍存保護劑根據其是否穿透細胞膜可分為滲透性和非滲透性兩類。滲透性冷凍保護劑多是一些小分子物質,可以透過細胞膜滲透到細胞內。包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、和甲酰胺等。這類保護劑能夠在細胞冷凍懸液wanquan凝固之前,穿過細胞膜滲透到細胞內,在細胞內外產生一定的摩爾濃度,降低細胞內外未結冰溶液中電解質的濃度,從而保護細胞免受高濃度電解質的損傷。同時,細胞內水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮。
非滲透性冷凍保護劑一般是些大分子物質,不能滲透到細胞內。該類保護劑主要包括聚yi烯吡ge烷酮、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白及Hetastarch等。其保護機制的假設很多,其中一種可能是,聚yi烯吡ge烷酮等大分子物質可以優先同溶液中的水分子相結合,降低溶液中自由水的含量。使冰點降低。減少冰晶的形成;同時,由于其分子量大,使溶液中電解質濃度降低,從而減輕溶質損傷。
zuichangyong的凍存液通常為胎牛血清中添加10%二甲基亞砜(DMSO),二甲基亞砜(DMSO),可以減少冰晶的形成,減輕自由基對細胞損害,改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性,可以很好地在細胞凍存過程中保護細胞。
但近年來,隨著人們對安全無毒的追求,而DMSO對細胞具有一定的毒性,牛血清存在病原菌污染的可能,所以越來越多不含血清、不含DMSO的安全、有效,凍存液被開發出來。
比如CN109430248A公開的凍存液,包括基本培養基、丙三醇、脯氨酸、四氫甲基嘧啶羧酸和右旋糖酐,具體配制比例如下:基本培養基:丙三醇:四氫甲基嘧啶羧酸=100:20-50:15-30;基本培養基:脯氨酸:右旋糖酐=100mL:5-15g:5-20g。
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