ELISA試劑盒溫育這一步是ELISA測定中zui簡單出現問題的過程，所以有時候一份標本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。加在孔壁上部的非包被區，易致使非特異吸附。其次，如今的產品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗室運用時對所供給的濃縮液稀釋制造，因而稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。這么做的意圖，首要是為了在后面的溫育反響過程中，能使反響微孔內的溫度能較快地到達所請求的高度，以滿足測定請求。再如醫治藥物的檢查，應根據藥代動力學挑選服藥后的最適時刻抽血檢查。溫育所需時刻與溫度成反比，即溫度越高，則所需時刻相對較短。運用微量加樣器加樣必需留心的紐帶點是：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺起和產氣憤泡。對用于激素和醫治藥物測定的血清標本的搜集，要留心搜集時刻甚或體位有也許會對測定成果發生影響。

溫育是ELISA測定中影響測定勝敗最為紐帶的一個因素。ELISA試劑盒如今上運用血清標本測定的標志物通常有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和醫治藥物等。試劑的參加在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留心滴加的角度外，滴加的速度也很主要，滴加太快，很容易泛起重復滴加或加在兩孔之間的景象，這么就會在孔內的非包被區泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。如可de松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發性方法開釋，因而，在測定此類激素時，有必要在嚴密密切相連的時刻間隔內采取數份血樣本，以其間心值為測定值。因而在ELISA測定中試劑的準備最為紐帶的是，在試驗開端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在運用前與室溫平衡。加血清樣本及反響試劑在如今的ELISA試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是du一的要運用微量加樣器參加樣本的過程。

ELISA試劑盒測定現通常為采用手藝操縱的以微孔板條為固相的測定形式，測定操縱非常儉樸，通常涉及到標本的搜集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果斷定和成果演說及解說等方面，其間任一過程的不妥都會影響測定成果，且尤以加樣、溫育和洗板等過程為甚。濺起會對接近孔發生污染。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢查的血清標本的搜集則沒有時刻和體位方面的影響。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的聯系反響在固相長進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原che底聯系，必需在必定的溫度前提下反響必定的時刻。