近期不斷發生的幾起核酸檢測“假陽性”事件,對于奮戰在抗疫前線核酸檢測人員而言,除了應對大規模、巨量的“新冠”樣本檢測任務外,應該警惕核酸檢測中的“異常”情況。
PCR技術具有靈敏度高、特異性好的優點,病毒檢測的“金標準”正是PCR核酸檢測技術。但 PCR 技術的高靈敏度也有優劣,理論上一個核酸分子的污染都有可能引起結果的假陽性。而核酸檢測工作環節繁復,在采樣和檢測環節,均存在引發“假陽性”樣本出現的可能性,其中實驗室環節是形成“假陽性”的主要風險點。
根據PCR檢測流程,一份樣本從進入實驗室到出結果,需要經過標本前處理、核酸提取、試劑配制、加樣、上機擴增、結果分析等多個環節,每一個環節處理不慎都會導致結果“假陽性”。
首先是標本間交叉污染。如收集標本的采樣管被污染;采樣管在開蓋時,形成的病毒氣溶膠導致的樣本間污染;核酸提取過程中,移液器或槍頭的污染。
其次是陽性質控污染。從核酸提取到擴增的過程中,每板檢測都會有陰性和陽性質控品,如操作不慎,陽性質控也可能會污染樣本;
另外有儀器、試劑或耗材的原因。核酸檢測儀器一直處于滿負荷、連續工作狀態,勢必會影響升降溫過程,或是個別試劑存在非特異性擴增現象,或是PCR板封膜不嚴,PCR管在加熱過程中出現融化、體積變化、漏蓋等情況,都有可能導致PCR擴增曲線出現“翹尾”現象甚至假陽性。
然而,最令PCR實驗室頭疼,或是核酸檢測人員“談虎色變”的是氣溶膠污染。PCR實驗室中,陽性標本或陽性質控的擴增產物若處理不當、實驗室管理不善、操作不夠規范,極易形成PCR產物氣溶膠,而污染實驗環境從而出現假陽性,且短期內很難清除。這一問題表面上可通過更換不同的試劑予以解決,但目前新冠試劑大多都采用相同的引物探針序列,擴增區域大同小異,因此實際上也不能很好地解決擴增產物污染問題。所以實驗室除了配備不同擴增片段的復檢試劑外,如何規范地做好日常維護,有效預防或清除氣溶膠污染就顯得尤為重要,應該是日常核酸檢測中的“重中之重”。
02、核酸氣溶膠污染傳統解決方案
傳統核酸氣溶膠污染解決辦法通常主要使用商品化DNA去除劑,并輔以紫外燈照射,甚至是實驗室空置、通風等手段。商品化的DNA去除劑,通常通過手持噴壺,在空氣中噴灑清除劑,清除氣溶膠效果有限,同時還有抑制后續PCR擴增的風險;常規的紫外燈照射,對大片段的核酸氣溶膠可能會有效,但對小于300bp的PCR擴增產物來說,效果不明顯;在常態化核酸檢測的背景下,大多PCR實驗室都是滿負荷運轉,通過空置和通風來解決氣溶膠污染也不現實。
03、核酸氣溶膠污染傳統解決方案
熠創鼎惠(上海)生物科技有限公司致力于為PCR實驗室提供高效安全的核酸氣溶膠污染解決方案,改變“手工清除并等待,實現“智能清除即檢測”,PCR實驗室變革創新核酸氣溶膠清除方法,降低實驗室PCR氣溶膠污染概率并杜絕污染擴散的發生。
Ares系列核酸氣溶膠污染清除儀搭載工業級分散系統,將核酸氣溶膠清除劑轉化為干霧狀態的氣溶膠清除因子。通過剪切霧化作用,加強霧化清除因子的清除能力,充分捕捉PCR氣溶膠,并通過鏈式化學反應破壞核酸分子的共軛雙鍵,繼而通過光觸媒反應,進一步降解PCR氣溶膠,同時,通過氣溶膠吸附屏物理吸附“漏網”的氣溶膠,達到多維度高效清除擴增產物污染的效果。
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