96孔培養板在細胞操作中也嚴格遵循無菌原則,操作過程中要做到規范、科學,不會影響細胞生長。其中最常見的問題是如何保證細胞在加樣后均勻化,并盡量減少換液對細胞生長狀態的影響。請問如何將細胞混合在一起?是滴管吹打還是振蕩培養皿?如果是后一種情況,那么細胞就會因為離心力的作用而被甩到周圍,導致細胞越少,細胞就越多!
這里提供了一個很好的方法:將培養板放入培養箱中,在培養皿中浸泡幾個小時,然后將培養皿放入培養皿中,使培養皿內的細胞生長均勻。記住,不要使用振蕩器振蕩,否則細胞會像你所說的那樣聚集起來。
培養板的孔徑越小,這種現象就越明顯,24孔和96孔板是不可避免的,因為液體的附壁使孔內培養液不是在液面上,而是像凹鏡一樣高,而使用這兩種孔板,由于需要干預等原因,不能加足夠的培養液,導致細胞和培養液一起出現“邊集”現象,如果要在孔中央也有均勻的細胞,就必須增加接種細胞的數量。
在消化細胞的時候要注意吹打均勻,避免細胞成團,同時要保證孔內培養液的量,一般情況下,接種時要加足夠的培養液,干預液和培養液的量等于接種時培養液的量,這樣就能改變“邊集”現象,值得一試。
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