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PCR試劑盒注意事項

來源:上海研啟生物科技有限公司   2022年06月27日 16:13  



1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1 樣本前處理

取動物組織及其制品食品或飼料1g,手術剪剪碎混勻后0.5g于研磨器中研磨,1.5mL理鹽水后 繼續研待勻漿后轉至 1.5mL滅菌離心管中,8000rpm2min,取上清100μL1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦份有限公劑(磁珠酸提取,請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR反應管管數為 N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照;樣品每滿

10 份,多配1 ),每測試反應體系配制如下表:

試劑

Chicken反應液

酶液

用量(樣本數為 N

20μL

1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR反應管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區)

將步1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR儀反應槽內;

4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置25μL

熒光 Reporter DyeFAM 道(Quencher DyeNONE,ABI選擇ROX參比熒光,選擇 None即可。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行;

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,*混勻并短暫離心;

3.反應液應避光保存;

4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

7.實驗完畢后10%次氯酸75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。


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