康寧基底膜基質可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞,厚層凝膠法允許您在三位基質內培養細胞,薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質層,您可以在其上培養細胞。您的選擇基于您想要實現的最終結果,無論是細胞生長、附著還是分化。
薄層凝膠法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
2. 將培養板放置在冰上,以 50 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質。
3 將培養板放置在 37 °C ,30 分鐘。
4. 如果有必要的話,請在使用無血清培養基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養板現在可以使用了。
厚層凝膠法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
2. 將培養板放置在冰上。向康寧基底膜基質中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質。
3. 將培養板放置在 37°C,30 分鐘。現在可以添加培養基了。細胞也可以培養在這一凝膠的頂部。
薄層包被法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
2. 使用無血清培養基將康寧基底膜基質稀釋到需要的濃度。對于您的應用程序,您應該完成以經驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。
3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質。加入的量應該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養 1 個小時。
4. 吸出未結合的材料并使用無血清培養基輕柔地漂洗。培養板現在可以使用了。
細胞復蘇:
康寧中性蛋白酶(貨號 354235),康寧細胞復蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復蘇溶液在冰上 7 小時內解聚康寧基底膜基質能夠實現將生長在康寧基底膜基質上的細胞有效地復蘇,或者使用中性蛋白酶,考慮到連續培養,中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。
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