唾液酸（SA）是酸性單糖的家族名稱，包括 N-乙酰神經氨酸 (NeuAc) 和 N-羥乙酰神經氨酸 (NeuGc)，主要存在于聚糖的非還原末端。是一種天然存在的碳水化合物，最初由頜下腺粘蛋白分離出，因此而得名。唾液酸通常以低聚糖，糖脂，糖蛋白的形式存在。唾液酸可以以 α2,3- 或 α2,6- 鍵類型存在。這樣的連接異構體在生物學上很重要，因為不同連鎖類型可能與各種疾病有關，例如病毒感染和癌癥。

近年來，質譜技術已被廣泛應用于分析聚糖。然而，鑒定含有多個唾液酸殘基的復雜聚糖的唾液酸鍵類型仍然具有挑戰性。本研究工作通過使用“SialoCapper-ID 試劑盒”進行*的衍生化，然后進行 MALDI-8020 MS分析，從而鑒定2-氨基吡啶（PA）標記的聚糖上的酸譜系類型。

SialoCapper-ID 試劑盒是一種用于聚糖預處理的新型試劑盒，可簡化唾液酸鍵特異性烷基酰胺化 (SALSA 方法）步驟。SALSA通過中和殘留物來防止在聚糖預處理和 MS 分析過程中唾液酸殘留物的損失。此外，它允許通過以特定鍵的方式衍生殘基來基于 MS 區分唾液酸鍵異構體。

SALSA法的衍生方案

本實驗中，N-連接聚糖通過肼解作用從51只大鼠102只耳蝸血管紋衍生的糖蛋白中釋放出來的。N-聚糖的還原端用PA標記。然后根據唾液酸的數量通過 DEAE 陰離子交換 HPLC 對 PA 標記的聚糖進行分離，并在 ODS 柱上使用反相 (RP) HPLC 進一步分離。使用酰胺柱和 LC-MS 通過正相 (NP) HPLC 分析分級的 N-聚糖，并根據二維 (2-D) HPLC 分析 (RP/NP) 的結果確定 N-聚糖的結構 和 LC/MS 分析。最后，使用 SialoCapper-ID Kit 進行唾液酸鍵特異性衍生化，用于未確定唾液酸鍵類型的分離。

在用碳芯片對 14 份 PA 標記的聚糖進行脫鹽后，使用 SialoCapper-ID 試劑盒在試管中以液相反應的形式進行唾液酸鍵特異性衍生化。

除了通過 2-D HPLC 和 LC/MS 進行結構測定外，研究者另辟蹊徑，使用MALDI-8020+ SialoCapper-ID 試劑盒根據唾液酸鍵特異性衍生化產生的質量變化來區分唾液酸鍵類型。相對于LC/MS，MALDI-MS有利于輕松快速鑒定唾液酸鍵類型，特別是在分析多個樣品時。

A1-14 組分的質譜圖和唾液酸鍵型鑒定結果

A2-16 組分的質譜圖和唾液酸鍵型鑒定結果

MALDI-8020+SialoCapper-ID 試劑盒唾液酸結合異構體鑒定優勢

1 無需與標準聚糖樣品的分析結果進行比較，即可識別復雜聚糖的唾液酸鍵類型。

2 SialoCapper-ID Kit可應用于標記糖鏈，無需改變常規分析流程即可進行唾液酸鍵聯分析。

3 無需 LC 分離， MALDI-MS 直接鑒定唾液酸鍵類型。

MALDI-8020是島津MALDI家族一款體積小巧，性能優良的特色產品。榮獲2018 IBO工業設計大獎銀獎。

主要特點：

● 線性臺式MALDI-TOF

● 200Hz固態激光器，355nm波長

● 進樣速度快

● TrueClean™自動源清潔功能。配備大口徑離子光學系統，使儀器長期使用中源的污染風險降到最低。配備基于紫外激光器的源清潔功能，可自動快速實現源自清潔。

● 靜音（<55dB）

● 可視化工作狀態

參考文獻：

島津應用新聞：Sialic Acid Linkage Isomer Discrimination of N-glycans

derived from Rat Cochlea using SialoCapper-ID Kit

M. Inuzuka, T. Nishikaze

本文內容非商業廣告，僅供專業人士參考。