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qPCR軟件報錯了？別慌，這篇文章會給你答案！
在運行qPCR實驗或分析數據時，有時候會遇到軟件報錯，小編在這里列舉了Applied BiosystemsTM 品牌儀器軟件的常見報錯，分析了可能的原因和解決辦法，如果您正在使用我們的儀器，希望本文能給您提供一些解決軟件報錯問題的思路。
一、通用報錯(多款機型軟件均可能出現)
1. 打開數據分析軟件報錯：java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。點擊OK接受后，擴增曲線是空白(如圖stepone plus軟件)。
問題分析：
可能是單次數據異常，導致校正文件丟失。在軟件上點擊Analysis > override calibration > Use another calibration file 下選擇同儀器相同類型實驗文件做校正 ，重新分析后可以恢復正常數據。出現該報錯的原因可能是雙擊了start run, 或者分析/保存數據過程被中斷，例如分析/保存過程中關閉軟件或拔出U盤。
2. 打開數據分析軟件報錯：Analysis cannot proceed: not enough sample definded（如圖stepone plus軟件，此報錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。
問題分析：
plate setup步驟未給樣品孔設置sample信息，設置好sample信息后重新分析，數據可以恢復正常。
3. 打開數據分析軟件報錯：Analysis cannot proceed: not enough targets definded（如圖stepone plus軟件，此報錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。
問題分析：
plate setup步驟未給樣品孔設置target信息，設置好target信息后重新分析，數據可以恢復正常。
4. 打開數據分析軟件報錯：Analysis failed due to: GExSession doesn't exist in context。點擊OK 接受后，擴增曲線是空白（如圖stepone plus軟件）。
問題分析：
擴增循環階段未采集信號，需要打開信號收集標識。
5. 在多重反應程序設置中，給樣品孔添加ROX作為reportor 的探針時，報錯：Dye "ROX" already used in passive reference（如圖Q5軟件）。
問題分析：
儀器默認passive reference選擇ROX作為參比熒光，如果實驗中ROX是作為探針的報告基團，則需要將passive reference改成None，之后就可以在target設置中選擇ROX作為探針了。
6. 打開數據分析軟件報錯：The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized（如圖Q5軟件）。
問題分析：
可能的原因包括：
1. 通過導入文件(import plate setup)在實驗中添加了重復的樣本，使用了相同的sample name，建議編輯樣品名稱時不要使用相同的sample name 命名樣品。
2. 實驗名稱包含不合要求的字符，例如空格，括號等，建議實驗名稱不要使用不符要求的字符。
3. 文件受損，數據不完整，建議儀器運行過程中不要操作軟件。
4. 拷貝數據的U盤有故障，導致拷貝數據不完整，建議更換U盤重新拷貝數據。
1. 運行程序時報錯：1404 Hold duration too short for read。
問題分析：
數據采集時間太短，PCR循環階段data collection step 時間設置不小于31秒，melt curve 階段data collection step請勿修改。
2. 運行程序時報錯：Java Platform SE Binary has stopped working，實驗中斷。
問題分析：
如果通過直接雙擊已保存的edt模板文件去運行實驗程序，可能會出現報錯。建議先打開7500軟件，通過New Experiment > From Template導入edt文件進行實驗。
3. 點擊start run時報錯"The instrument type for the experiment is not compatible with the connected instrument"。
問題分析：
實驗中選擇的儀器類型與實際使用的儀器不符，需要到Setup界面重新修改為正確的儀器類型。
4. 程序設置報黃色提醒 "number of data collection points is not valid"
問題分析：
運行程序設置了多個信號采集點，定量實驗中只能設置一個信號采集點，可以設置在cycling stage 。
5. eds文件導入PTS軟件，報錯"cannot import any experiment file(s) because of the following error(s): "
問題分析：
使用7500 v2.4版本軟件產生的數據與PTS軟件不兼容，可以將eds數據先用7500 v2.3的軟件打開，分析后保存，然后再導入PTS軟件。
1. 數據打開后擴增曲線是空白，點擊Analyze分析后報錯：The analysis cannot proceed because the experiment is missing required plate setup information. Go to 'Define' and 'Assign' page to creat and assign targets and samples. 點擊OK接受后，擴增曲線仍是空白。
問題分析：
plate setup步驟未給樣品孔設置target或者sample name信息，設置好target或者sample name信息后重新分析，數據可以恢復正常。
2. 運行PTS實驗報錯：Star run validation: The filter set has not been selected for following target: ROX(x4-m4)。
問題分析：
含melt curve的實驗程序中，軟件默認melt curve filter只選擇X1M1，PTS實驗需要從軟件進入Method-action-optical filter settings, 在melt curve filter選項中將x4m4選中（Q5也可以嘗試x1m3）。
3. 打開數據分析軟件報錯：Analysis failed due to insufficient data。
問題分析：
1.4.3之前版本的軟件有bug, 部分染料法實驗結果擴增曲線是空白，解決方法是在analysis setting 點擊apply，即可恢復正常顯示。1.4.3之后的軟件版本無此問題。
1. 開始運行實驗前報錯：You must first download experiment"XXX"before you can start another run on this instrument.
問題分析：
上次運行實驗沒有正常傳輸到電腦端，需先將上次實驗數據下載到電腦然后才能開始運行。在軟件上點擊Instrument > Download Experiment from Instrument下載數據后，即可重新開始運行試驗。
2. 打開數據點擊analyze分析軟件報錯：Cannot calculate Pure Dye Matrix。
問題分析：
該報錯指示運行結果文件中有原始數據丟失，可能是實驗程序沒有運行結束或在運行過程中被終止所導致。例如客戶將反應程序最后一步設置為infinite holding stage，最后通過點擊STOP結束程序容易導致該問題。針對這樣的數據，可以聯系技術支持尋求幫助。
3. 查看熔解曲線時出現黃色報錯：No derivative curve for all selected wells due to excessive noise in fluorescence data.
問題分析：
熔解曲線程序設置錯誤，如下圖中數據誤刪掉了60度的步驟，設成了95度升溫到95.3度。建議使用SYBR Green染料法做實驗時，不要修改熔解曲線步驟，使用儀器默認程序即可。
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