做蛋白表達實驗時,通常用SDS-PAGE電泳檢測目的蛋白的表達情況,MARK是其中非常重要的參照物,使用Mark會遇到以下幾種情況:
條帶模糊:
電壓過高或電泳時間過長,產熱過多導致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產品使用說明書。
電泳緩沖液陳舊,建議使用新鮮的電泳緩沖液,為了獲得理想的結果建議在使用前將緩沖液預冷。
分離膠的濃度偏低,建議使用合適的膠濃度。
SDS-PAGE凝膠放置時間過長,建議使用新配制的凝膠電泳。
帶型不整齊:
建議點樣時將蛋白marker 放在泳道中間。如在凝膠兩側泳道,由于邊緣效應,離子強度不勻等,均會導致帶型變寬或彎曲。
凝膠配制不勻,凝膠內存有氣泡,或點樣孔中有細碎的殘膠。
樣品滯留點樣孔:
濃縮膠配制有問題或膠孔堵塞。
Marker蛋白表達檢測
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
技術原理
免疫熒光技術是根據抗原-抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在抗體的性質和定位。
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