本文由中國藥科大學(xué)天然藥物國家重點實驗室藥物代謝與藥代動力學(xué)重點實驗室所作，發(fā)表于Talanta 165 (2017) 128–135。

近年來，基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜成像（MALDI-TOF-MSI）技術(shù)受到了廣泛的關(guān)注，因為它可以對動植物組織切片中不同的分子進行定位，盡管在逐點絕對定量中仍存在一些障礙。奧曲肽是一種合成的生長抑素類似物，在臨床上廣泛應(yīng)用于預(yù)防胃腸道出血。

本研究的目的是建立一種定量顯示奧曲肽在小鼠組織中空間分布的MALDI-TOF-MSI方法。在這個過程中，一個結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標物與基質(zhì)溶液一起被點到組織切片上，以盡量減少信號變化，并給出良好的定量結(jié)果。通過比較奧曲肽與不同基質(zhì)共結(jié)晶后MALDI-TOF-MSI產(chǎn)生的信噪比，選擇2,5-二羥基苯甲酸作為最合適的基質(zhì)。通過測定不同濃度的新鮮組織切片中奧曲肽的含量，驗證了MALDI-TOF-MSI在線性、靈敏度和精密度方面的可靠性。驗證的方法成功地應(yīng)用于奧曲肽在小鼠組織中的分布研究。

結(jié)果表明，MALDI-TOF-MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽的空間分布，而且可以計算關(guān)鍵的藥代動力學(xué)參數(shù)（Tmax和t1/2）。更重要的是，MALDI-TOF-MSI測定的奧曲肽的組織濃度-時間曲線與LC-MS/MS測定的結(jié)果一致。這些發(fā)現(xiàn)說明了MALDI-TOF-MSI在藥物開發(fā)過程中的藥代動力學(xué)分析潛力。

使用儀器：島津MALDI TOF、 LC–MS/MS

圖1 內(nèi)標對MALDI-TOF-MSI分析小鼠肝切片中奧曲肽線性的影響。(A) 小鼠肝臟切片上的蘭瑞肽(內(nèi)標)的質(zhì)譜圖，(B)加入奧曲肽標準溶液的肝臟切片光學(xué)圖像，(C)5個濃度水平的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像([M+H]+離子;m/z 1019 Da)，(D) 用奧曲肽的平均信號強度繪制的奧曲肽校準曲線(n=5)，(E)經(jīng)內(nèi)標校正后的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像，(F) 用奧曲肽/內(nèi)標的平均強度比繪制的奧曲肽校準曲線(n=5)

圖2 對口服20 mg/kg奧曲肽后0、10、30、60、90和120 min采集的小鼠組織進行成像MS分析。(A)胃切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像，(B)腸切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像，(C)肝切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像

圖3 MALDI-TOF-MSI和LC-MS/MS測定奧曲肽的組織濃度-時間曲線。(A) MALDI-TOF-MSI法測定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時間曲線;(B) LC-MS /MS法測定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時間曲線;(C) LC-MS/MS法和MALDI-TOF-MSI法測定小鼠胃中奧曲肽的含量的相關(guān)性分析。

本研究開發(fā)了一種基于MALDI-TOF-MSI的小鼠組織切片奧曲肽定量分析方法。首次通過比較DHB、CHCA和SA提取的奧曲肽在一系列激光功率水平下的信噪比，系統(tǒng)研究了激光能量對MALDI基質(zhì)選擇的影響。結(jié)果表明，DHB、CHCA和SA的*功率水平應(yīng)分別設(shè)置為50、70和60，DHB因其較高的靈敏度和較低的基質(zhì)效應(yīng)最終被選為最合適的MALDI基質(zhì)。蘭瑞肽是一種與奧曲肽結(jié)構(gòu)相似的生長抑素類似物，被用作內(nèi)標，通過減小組織異質(zhì)性、基質(zhì)晶體異質(zhì)性和激光功率波動引起的離子信號變化，提高分析的線性、準確性和精密度。然后成功地應(yīng)用所開發(fā)的MALDI-TOF-MSI方法，觀察口服20 mg/kg劑量后，奧曲肽在小鼠胃、腸、肝中的分布和消除過程。

結(jié)果表明，MALDI-TOF MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽在小鼠組織中的空間分布，而且使關(guān)鍵藥物動力學(xué)參數(shù)(Tmax和t1/2)的計算成為可能。更重要的是，MALDI-TOF-MSI測定的奧曲肽的組織濃度-時間曲線與LC-MS/MS絕對定量的結(jié)果吻合較好。

文獻題目

《Optimization and evaluation of MALDI TOF mass spectrometric imaging for quantification of orally dosed octreotide in mouse tissues》

使用儀器

島津MALDI TOF、 LC–MS/MS

作者

Tai Rao, Boyu Shen，Zhangpei Zhu, Yuhao Shao, Dian Kang, Xinuo Li, Xiaoxi Yin, Haofeng Li,Lin Xie, Guangji Wang, Yan Liang

Key Lab of Drug Metabolism & hamacokinets,State Key Laboratory of Natural Medicines,China Pharmaceutical University, Tongjiaxiang 24, Nanjing 210009 PR China