血清作用原理:
正因為血清來源于動物,含有細胞培養中所需的各種營養(血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等),所以奠定了血清是細胞培養實驗中最基本普遍試劑的基礎。血清通常用作細胞生長的添加物,擁有多種功能和用途,如:富含大分子蛋白,低分子量的營養素,作為氨基酸、碳水化合物、維生素的額外來源;提高介質的緩沖能力;可結合或中和有毒成分;減少細胞氧化應激,減少細胞凋亡;提供促進生長的因子,有助細胞適應環境。
▽ 成分表
血清通過牛齡進行分類,可大致分為:
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS)、國產胎牛血清(并無明確定義,但通常用此命名)、新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS,或稱小牛血清)、成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡稱ABS)。
不同牛齡血清所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組分與比例不同。
▽ 比較
一、透析胎牛血清
①細胞培養條件下穩定同位素標記技術(簡稱SILAC)
這是一項以質譜為基礎的定量蛋白質組學技術,全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養基中培養細胞,來標記細胞內新合成的蛋白質,一般培養5-6代,細胞中的蛋白質將都被同位素標記。然后質譜分析,即可比較經過不同處理的細胞,其內部蛋白質豐度的變化。它還可用于正常細胞與病理狀態細胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸)。
②工程細胞株的篩選
以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),必須在添加了次黃(嘌)漂呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質粒轉染細胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養基上也能生長的細胞克隆。通過甲氨蝶呤(MTX)進一步篩選,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆。這時的胎牛血清由于不含有次黃(嘌)漂呤和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養基的一部分,參與陽性轉染細胞克隆的篩選。
二、碳吸附胎牛血清
活性炭能夠結合脂溶性分子,通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度,如雌二醇、皮質醇、皮質酮、孕酮、B類維生素、睪酮及T3、T4、前列腺素等。該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結果的實驗中,對于那些需要這些分子的細胞培養,也可能降低細胞生長性能。
碳吸附胎牛血清用于體外培養,去除背景值以驗證激素的作用效果,研究包括醇類受體連接,細胞受體類固醇調節,各種組織激素分泌和甲狀腺激素功能。
適用于:培養干細胞、原代細胞、神經細胞、人類癌細胞、人類骨髓細胞、白血病細胞、人類胚肺成纖維細胞、人類腦神經細胞和瘤細胞等細胞。
三、去外泌體胎牛血清
△外泌體
胎牛血清中含有大量的外泌體,但在外泌體研究中,如果仍然使用胎牛血清培養細胞,并通過收集上清液來提取外泌體進行實驗,那么胎牛血清中本身的牛源外泌體將會對實驗分析造成極大的干擾。去外泌體血清是將由無菌采集的健康胎牛血清經過過濾,去除≥99%的胎牛血清內源外泌體,還可使細胞在培養時與未處理的胎牛血清具有相同的增殖速率和形態。
四、四環素調控系統胎牛血清
五、低IgG胎牛血清
六、去脂胎牛血清
去脂胎牛血清在細胞培養中用量較多,其含有豐富的細胞生長必須的營養成分,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
①提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物以及主要的低分子營養物。
②提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
③有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱源質結合,起到解毒作用。
④是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基上所需因子來源。
⑤起酸堿緩沖液作用。
⑥提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’與腺樣囊性癌肺轉移相關性研究:
①蛋白激酶是酶類這個家族中最龐大的一員,被用來完成蛋白磷酸化作用的催化,這是控制細胞生命活動中最通常的機制。其中*有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2。蛋白激酶CK2(protein kinase CK2, PKCK2),過去曾經被稱為酪蛋白激酶-2或Ⅱ(cascin kinase2 or Ⅱ)。它是由兩個催化亞基(aa’)和兩個調節亞基(ββ)構成的不均一四聚體。
七、熱滅活系列血清
☆ 血清的使用方法
血清從冰凍區中取出后(切勿直接將血清從-20℃置入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀),放置于2℃~8℃中使之融化,解凍過程中間歇地輕輕搖晃均勻,待全部溶解后再分裝或直接使用。*融解的血清從4℃拿出,按要求比例(5%-20%)加基礎培養基配置成*培養基,建議使用不完時,置于4℃冰箱存放并于1-2周內用完。
☆ 使用血清時的注意事項
血清沉淀的物質主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),脂蛋白,冷凝集素,玻連蛋白,胎球蛋白,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點沉淀),膽固醇等。
哪些原因容易導致血清沉淀:
1、溫度改變太大,血清由-20℃直接放入37℃解凍,因溫度改變劇烈容易導致沉淀。
2、血清在室溫或4℃冰箱放置時間太久,血清中的不穩定成分會被破壞,影響細胞生長效果;導致血清品質變差,也會產生沉淀。
3、血清分裝凍存時,注意在不產生氣泡的情況下搖晃均勻,避免因血清成分濃度改變產生沉淀。
4、血清滅活后容易產生沉淀,如需使用滅活血清,請按56℃,30分鐘,輕微搖晃原則操作,滅活溫度過高、時間過長、搖晃不均都容易產生沉淀。
5、如有血清沉淀,分裝后進行離心處理,建議400g離心5分鐘,取上清使用。
結語:
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品牌 | 名稱 | 血源 | 貨號 | 規格 |
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美國Zeta Life | 超低內毒素胎牛血清 | 哥倫比亞 | Z7180FBS-500、Z7180FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 南美胎牛血清 | 烏拉圭 | Z7181FBS-500、Z7181FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 南美胎牛血清 | 巴西 | Z7185FBS-500、Z7185FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 法國胎牛血清 | 法國 | Z7186FBS-500、Z7186FBS-100 | 500ml/100ml |
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