C18液相色譜柱要求流動相具備以下的特點:
a、對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
c、黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低黏度)。
d、物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
f、在配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止微量氧與樣品發生作用。
C18液相色譜柱的安裝:
1、液相色譜柱的結構:空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
2、色譜柱的安裝:
a、拆開柱包裝盒,確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標示的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接;柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直到擰不動為止,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現象,請用扳手繼續順時針擰1/4圈,直至不漏液為止。
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