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HcorF細胞人角膜上皮細胞

來源:合肥星肽生物科技有限公司   2020年05月14日 17:27  

合肥星肽生物科技有限公司成立于2019年,注冊資金100萬元,公司辦公場所坐落合肥光谷生物城。星肽生物致力于為行業(yè)內(nèi)的客戶提供技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓等服務(wù),秉承著“我們用心 客戶省心”的服務(wù)理念打造出一支敢于創(chuàng)xin、敢于挑戰(zhàn)的綜合務(wù)團隊。

星肽生物主營業(yè)務(wù):細胞庫、試劑、/抗原、、多肽、耗材/消耗品、實驗儀器/設(shè)備、器械等。

星肽生物以技術(shù)為主導(dǎo),產(chǎn)品的質(zhì)量為核心,服務(wù)體系為保障,發(fā)揮人才優(yōu)勢,長期致力于打造成*的科研企業(yè)與機構(gòu)。

星肽生物持續(xù)通過開放的合作態(tài)度、專業(yè)的服務(wù)機制、持續(xù)的**理念全力打造企業(yè)的核心競爭力為成為上等的行業(yè)服務(wù)供應(yīng)商銳意進取。

HcorF細胞人角膜上皮細胞。復(fù)蘇操作流程

 

1. 準(zhǔn)備工作,開水浴鍋,預(yù)熱試劑,超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應(yīng)細胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后風(fēng)機吹 10min 后,酒精擦拭臺面,放入試劑和離心管,取 15ml 離心管,加入 9ml 培養(yǎng)液

3. 在液氮罐中取出細胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min

4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內(nèi),擦干管壁,用 1ml 頭將細胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中

5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平

6. 將離心好的細胞棄上清,加入 5ml *培養(yǎng)基重懸,用移液管吹打 8-10 次, 避免產(chǎn)生氣泡,將細胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中,補加 5ml 培養(yǎng)液

7. 混勻,十字法或者 8 字法

8. 將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

 

HcorF細胞人角膜上皮細胞。注意事項

 

1. 上述操作方案的數(shù)據(jù)可作為參考,實際操作已實驗室配備的耗材為準(zhǔn),

2. 凍存時含 10%DMSO,事先加 9ml 培養(yǎng)液是為了稀釋 DMSO,理論上 1%DMSO

對細胞性

3. 隔著 PE 手套能有效防止水浴過程中導(dǎo)致污染

4. 重懸的體積只是作為參考,具體的根據(jù)需要可進行調(diào)整

5. 由于復(fù)蘇過程中已經(jīng)離心,第二天可根據(jù)實際情況選擇換液或者不換液(主要針對貼壁細胞)

HcorF細胞人角膜上皮細胞。培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mLHcorF細胞人角膜上皮細胞。懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

HcorF細胞人角膜上皮細胞。培養(yǎng)注意事項

1. 收到HcorF細胞人角膜上皮細胞。后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀HcorF細胞人角膜上皮細胞。說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4.靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細 胞匯 合度80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6.建議客戶收到HcorF細胞人角膜上皮細胞。后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和 志偉技術(shù)  溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

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