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ELISA試劑盒中顯色劑A,B順序可以顛倒么?

來源:上海瑞番生物科技有限公司   2019年09月04日 10:02  

關于顯色AB加入的順序本人還是應該有比較大的關系的!那么顯色液中A是過氧化氫 顯色液是TMB 一般都是這兩種,那么應該怎么去理解呢說明書說先加A再加B ,其實得根據HRP跟TMB跟H2O2的反應:HRP+H2O2+DH2(色原底物其實就是TMB)==2H20+藍色陽離子根 +終止液(硫酸)==黃色聯苯坤
HRP催化H202產生氧,然后與TMB反應,所以這里如果A先加進去跟HRP充分反應的話然后再加入TMB讓氧離子跟TMB充分反應,可能顯色的結果會好一點!
由于TMB這種色原底物反應后如果終止液中混有還原劑的話,可以產生逆反應導致藍色褪色!但是這種情況應該不會出現吧!
還有洗板機的問題,如果覺得洗的不干凈,用純水沖一遍!沖的話也是直接往板里倒水!根本就不用考慮什么交叉問題!因為如果隔壁這個陽性標本的血清跑到隔壁去沒經過孵育就可以結合的話,那我剛開始還要孵育干嘛,直接加完樣洗掉就可以啦! 

后總結建議還是按說明說上的來操作,確保結果。

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