第三章 細胞培養和轉染 
1. 細胞培養(HEK293T) 
1) 顯微鏡下觀察細胞，細胞生長狀態良好，去上清； 
2) 加入預熱的PBS 3ml, 溫柔地清洗細胞,棄去PBS； 
3) 用胰蛋白酶消化細胞，通常75cm2 培養瓶的貼壁細胞用3ml 胰蛋白酶于37oC 
處理5min； 
4) 待細胞脫落后，加入5ml DMEM 培養液(含10%FBS)以終止消化反應，并將 
細胞懸液轉移入15ml 或50ml 離心管中； 
5) 1000rpm 離心5min，去除上清； 
6) 加入10ml DMEM 培養液(含10%FBS)，重新懸浮細胞，使細胞充分打散； 
7) 進行細胞計數,(4 個大方格細胞數的均值×104 個為每ml 所含細胞數)； 
8) 根據細胞計數結果，將適當數量的細胞懸液轉接入含有新鮮培養液的培養瓶 
或皿中；(第二天做轉染，A.Fugene6 法--細胞總量應達4-5×106 /10cm 培養 
皿; B. 磷酸鈣法: 細胞總量應達3×106 / 10cm 培養皿)； 
9) 置于37 ℃ 5％CO2 的培養箱中培養 (注意培養箱應有足夠的水分)。 
注：以上所使用的胰蛋白酶、培養液等在使用前都置于37℃水浴中預熱，以減 
小對細胞的刺激。 
2. 細胞轉染 
2.1 脂質體介導的貼壁細胞轉染法 
以下針對293T 細胞、10cm 培養皿 
目前主要使用試劑盒為Roche 公司的FuGENETM6 Transfection Reagent 
1) 轉染前24 小時以4-5×106 /10cm 培養皿的細胞總量鋪板，當細胞生長狀態 
第三章 細胞培養和轉染 
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良好且貼壁細胞密度達到50~80%時即可進行轉染； 
2) 在1.5ml 離心管中加入需要共轉的2 種質粒DNA 各5μg，混勻。 
3) 將50μl FuGENE6 脂質體加入500μl DMEM(serum free)培養液(注意不要 
將FuGENE6 脂質體沾到管壁)，加入前述DNA，輕輕混勻，RT 培養30 分 
鐘； 
4) 將含有DNA 和脂質體的液體小心加入到培養皿中，分散均勻，置于37 ℃ 5 
％CO2 的培養箱中培養24－48 小時。 
2.2 磷酸鈣介導的貼壁細胞轉染法