Q:我從液氮中取出小瓶Huh7細胞,然后在37℃進行10分鐘解凍,然后加入培養基+ 10%FBS,以1000rpm離心5分鐘以除去DMSO,然后將沉淀重新懸浮于新鮮培養基中。然后培養它。現在差不多4天了,但細胞沒有貼壁。大家能告訴我為什么細胞沒有貼壁嗎?
當我凍存細胞時,我將它們放入-80℃3天,然后將它們轉移到液氮中。
A:我傾向于認為未成長的原因如下:
1細胞在解凍期死亡
2細胞凍存不當
3污染
4使用不適當的細胞生長培養基
細胞在37°C解凍的10分鐘可能有點長。通常,如果使用水浴,3分鐘就足夠了。
關于細胞凍存,我認為在-80°C過夜就夠了,然后轉移至液氮中,不需要在-80°C放置三天。
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