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細胞生長不良的常見原因及解決方法
| 問題/原因 | 解決方案 |
|---|---|
| 從庫存中解凍后沒有或幾乎沒有活細胞 | |
| 細胞狀態很差 | 確保培養物已被正確鑒定，并且是健康的，沒有微生物污染，并且在生長的對數期后期（80-90％匯合）。 輕輕收獲細胞以防止損壞。 |
| 細胞凍存不正確 | 在液氮中凍存時，確保細胞，培養基和其他試劑 的濃度-以及冷凍方案-遵循供應商的建議。通常，細胞凍存應該以每分鐘約1至3℃的速度緩慢進行，以使冰晶形成小化。 使用電子可編程或機械冷凍裝置，以確保一致和適當的冷凍速度。為細胞選擇合適的細胞凍存液。如果使用甘油，請不要將其存放在光線下，因為光照會將甘油轉化為細胞毒性。 |
| 細胞凍存不正確 | 凍存應始終保持在-130°C以下的溫度，盡可能是在液氮中，以確保大的生存能力。在液氮上方的氣相中儲存優選儲存在液體本身中，因為如果液氮泄漏到冷凍管中，則在解凍期間存在小瓶爆炸的風險。 |
| 細胞復蘇不正確 | 復蘇細胞時，請遵循供應商推薦的方案。通常，細胞應快速解凍。使用預熱的媒體。 盡快去除含有細胞凍存液的培養基，以防止活力降低。 確保小心處理細胞。不要高速渦旋或離心，因為細胞在冷凍保存后特別容易受損。 |
| 從庫存或傳代解凍后細胞貼壁不良 | |
| 塑料容器上靜電積聚（濕度低時尤其有問題） | 增加室內濕度。 用（消毒的）濕毛巾擦拭培養皿外。 使用防靜電裝置。 |
| 細胞，培養基和/或其他試劑的混合不充分 | 確保細胞和所有試劑的溶液充分混合。 |
| 滾瓶的旋轉速度太快 | 以較慢的速度旋轉瓶子。 |
| 細胞生長緩慢 | |
| 細胞傳代次數過多 | 獲得已經傳代培養較少次數的新細胞。 |
| 收獲時細胞太融合 | 從新的細胞儲備開始，在生長的對數期收獲，然后達到100％匯合。 |
| 培養基，血清，緩沖液等質量差或配方不正確 | 丟棄當前試劑并使用新批次。 |
 CO 2電平不匹配是什么媒體的碳酸氫鹽緩沖系統需要被使用，從而導致控制pH值不足 | 確保培養箱CO 2 水平與緩沖系統所需的水平相匹配。通常，緩沖液中碳酸氫鹽的濃度越高 ，培養箱氣體混合物中所需的CO 2濃度越高。 |
| 微生物（尤其是支原體）污染 | 有關 預防和消除微生物污染的詳細實踐，請參閱 污染問題。 |
| 將培養物暴露于熒光下會使光敏介質成分（核黃素，色氨酸和HEPES）轉化為細胞毒性自由基和H 2 O 2 | 將細胞和培養基存放在黑暗中，遠離熒光燈。 |
| 不準確的細胞計數方法導致假定的細胞生長不良 | 確保計數樣品充分混合，以避免細胞密度的局部變化，從而影響細胞計數的準確性。 使用血細胞計數器的手動方法重新檢查用于確定計數的所有計算，或考慮自動細胞計數。 |
| 細胞生長不均勻 | |
| 容器內不均勻的細胞生長表明細胞和/或培養基的混合不充分 | 確保通過溫和的渦旋或移液將細胞混合物和所有試劑適當混合，以避免局部濃度變化。 |
| 在同一時間生長的可能相同的血管之間的不均勻細胞生長可能是由于培養箱內的溫度變化 | 盡可能避免將培養皿堆疊在一起，因為底部的容器靠近金屬架，并且可以快地加熱。 當儲存在孵化器前部的容器比后部儲存的容器生長較少時，請注意盡可能保持孵化器門關閉，并將容器向后移動。 |
| 具體增長模式： | |
| 培養箱中蒸發不均勻導致培養基體積減少和多孔板外孔生長不良 | 保持水庫充分加濕CO 2和其他傳入的氣體。如有必要，在孵化器中創建一個蒸發“熱點”的地圖，以避免在隨后的實驗中。 |
| 孵化器振動導致同心環（在餐具中），平行條或不規則圖案（在燒瓶中） | 將孵化器放置在堅固的表面上，而不與低流量區域的其他設備共用。盡可能遠離其他電動設備。 |
| 由于架子的金屬比周圍區域提供更多的熱量，因此稍微過高或稍微過低的培養箱溫度會分別導致點狀或交叉影線的圖案。細胞密度較高的點表明不與金屬接觸的細胞生長更好; 交叉影線表明細胞更喜歡溫暖的區域而不是金屬。 |  根據需要調整培養箱溫度，注意盡量減少培養箱打開的時間，從而導致熱量損失。裝有介質的假容器也可用于隔離與貨架的接觸。 |
| 非水平的培養箱架可導致不均勻的細胞密度 | 在使用之前，以及在孵化器清潔和維修之后使用水平擱板。 |
| 培養基中存在氣泡導致清晰的條帶（在滾瓶中），沒有細胞生長的斑點（在燒瓶和餐具中） | 小心地倒入或移取介質以避免氣泡。 |
| 冷凝導致垂直條紋（在滾瓶和燒瓶中） | 不要讓容器暴露在培養箱外的較冷溫度超過必要時間。使用前立即從培養箱中取出容器。 |
| 太小的介質體積沿著餐具和燒瓶的側壁產生增加的細胞密度環。這是由于彎月面的曲線在燒瓶或井的中心形成了介質貧乏區域。 | 向培養皿中加入足量的培養基。一般準則是每cm 2生長區域0.2-0.3mL培養基 |
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