細胞凍存液比例:
凍存液配制:
20%胎牛血清、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清、10%DMSO,更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細胞膜,降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點下降,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷.
FBS:DMSO 不是必須9:1, 這種方式太了,F(xiàn)BS很貴,且一般務(wù)必要,除非是貴重的淋巴細胞等。 一般用*培養(yǎng)基(含10-20%FBS)與DMSO按一定比例凍存,例如9:1 或95:5凍存,有一定偏差也是可以的。
另外,還有一些是無血清培養(yǎng)的細胞,也不能添加血清,這時就用無血清培養(yǎng)基(根據(jù)細胞特性定制的培養(yǎng)基)加入5-10%的DMSO來凍存。
總之,不是必須FBS:DMSO=9:1, 那是很古老的文獻資料里常提到的凍存方案。
細胞類型和細胞株個體特性。不同細胞有其凍存條件,不盡相同,需參考說明書和文獻。如果發(fā)現(xiàn)細胞凍存后狀態(tài)不佳,需要自己摸條件,或考慮污染和培養(yǎng)條件問題。
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