名稱:SK-OV-3（人卵巢癌細胞）(通過STR鑒定)

別稱:SKOV-3 Skov3

種屬:人

年齡（性別）:女；64歲

組織來源:卵巢腺癌，腹水轉移

生長特性:貼壁細胞

細胞形態:上皮細胞樣

背景描述:SK-OV-3細胞是由G·Trempe和L·J·Old于1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。SK-OV-3細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。SK-OV-3細胞在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

生長培養基 McCoy's ＋10% FBS(SERANA S-FBS-EU-015)＋1% P/S

推薦傳代比例:1:2-1:4

推薦換液頻率:2-3次/周

倍增時間:~20-48 hours

SK-OV-3（人卵巢癌細胞）(通過STR鑒定)凍存條件

凍存液：50%基礎培養基+40%胎牛血清+10%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性:;Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with ovarian primary.

抗原表達情況:Blood Type B; Rh+

基因表達情況:Blood Type B; Rh+

保藏機構:ATCC; HTB-77 ECACC; 91091004

SK-OV-3（人卵巢癌細胞）(通過STR鑒定)相關產品延伸.......

※正常情況下，融化后血清的外觀顏色應該是？

    血清為動物來源，成分復雜，不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

※血清應如何保存？

    未拆封的血清應存放于-15至-20℃，避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產品質量證書標識的效期內均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

※血清的有效期是多久？

    大部分胎牛血清效期是5年，針對每個批次，請通過質檢文件確定具體效期日期。

※血清應如何融解？

    從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時旋轉（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

※為什么有時血清中出現絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？

    多種原因可能導致絮狀沉淀的形成，好常見的原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現象一般不會影響產品質量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。

※為什么存放于冰箱中的血清會出現沉淀？如何避免該現象？

    在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時處于溶解狀態，在凍融過程中會發生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現象一般不會影響血清的性能?？梢?00g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現上述現象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。

※血清是否需要做滅活處理？

    這取決于您的應用。

    滅活過程中，會導致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。好常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。

※如何進行血清滅活處理？

    血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。好好準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴后，建議馬上轉移到冰上降溫。

※為什么需要對血清進行gamma射線輻照？

    gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。

※如何應對血清的批間差？

    生物試劑銷售中心銷售的胎牛血清產品通過嚴格的質控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點和來源，無法*避免批間差?？蛻艨梢酝ㄟ^做預測試等方式，選擇可滿足要求的血清批次。

SK-OV-3（人卵巢癌細胞）(通過STR鑒定)

其實，剛剛復蘇的細胞就像是剛剛出生的baby，非常脆弱，需要各位小伙伴的細心呵護，不然，細胞就會被我們花樣玩死。為了避免細胞不明不白的掛掉，我們就要對細胞的各種習性了如指掌。

1. 俗語道，到什么山上唱什么歌，不同細胞用不同的培養液。此時，就不得不提起培養基里的“四大金剛”—MEM、DMEM、1640、F-12，它們基本參與了90%以上種類細胞的培養過程。

MEM作為帶頭大哥，能力非常全面，號稱是應用好廣泛的細胞培養液。

DMEM作為隨時緊跟老大MEM的二弟，青出于藍而勝于藍，濃度要高出2~4倍，可分為高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三1640中規中矩，營養成分比較簡單，比DMEM少一點糖和谷光甘肽，常用于淋巴細胞的培養。

小兄弟F12常用來支持CHO、Hela和L－細胞生長以及原代大鼠肝細胞和前列腺上皮細胞的培養。MEM和F12 這兩種培養基各取1/2，即可形成神經生物學好通用的培養基。

2. 細胞生長的空間密度是細胞培養的關鍵。具體養細胞時應該摸索細胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細胞瓶里的細胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細胞濃度低于1~5×10^5個/mL而導致“孤獨死”（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）。因而細胞接種前，要先通過細胞計數來調整細胞濃度。

3. 當培養的貼壁細胞形態不好時，可在傳代時，先倒掉舊的培養基，加入3ml新的培養基（有無血清都可以）洗滌一次，用滴管吸走，再加入3ml培養基，沿著瓶底輕輕吹打一遍，然后吸走。這時再正式進行消化、吹打。

其次，把吹打下的細胞懸液加入到含有新培養基的培養瓶內，置于培養箱里培養，按時間點觀察細胞貼壁情況（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培養基，加入3ml新培養基再輕輕洗一次，然后加入*培養基培養并觀察細胞生長情況以及形態。直至找到細胞的形態為止。

4. 至于在培養瓶中加入多少培養基量，則是需要實驗汪們自己去摸索的。對于生長快的細胞，易生長的細胞加少一點培養基，細胞形態會更好，但是要注意對換液時間的把握。

5. 如何選擇培養瓶。一般，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞，用玻璃瓶培養的效果會更好。因此，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復蘇時或者原代培養），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。

6. 細胞凍存時，蓋子要擰緊，不然復蘇水浴時會滲水，造成細胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號的管子會有差別），蓋子擰緊后好好用封口膜封住。且每支凍存管都要標上細胞的名稱、凍存時間，并記錄在冊，以免后續復蘇細胞時，取錯細胞。

7. 細胞凍存時要嚴格進行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火兩重天的生活環境只會讓嬌弱的細胞自爆身亡，謹記：緩降溫！但如果真心趕時間時，可以使用細胞凍存盒進行細胞凍存，而后盡快將其轉入液氮中。此外，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細胞全部浸在液面下。

8. 細胞解凍時，由于凍存管管壁較厚、隔熱，而導致水浴時間太長（2min還沒融化）時，可以將水浴鍋的溫度調至40℃左右，可以縮短解凍時間。

9. 提前預定超凈臺，減少復蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細胞房人滿為患，超凈臺使用緊張，復蘇1h后，還沒有加入新的培養液。（高濃度DMSO防止胞內形成冰晶，凍存時保護細胞，但復蘇融解后，浸泡時間太久會對細胞有毒性）

10. 復蘇細胞時一定要有耐心，因為有些細胞在復蘇一星期后才會真正有起色。因而，盡管細胞在復蘇三四天后沒有任何動靜，也不要輕易倒掉所有細胞，要耐心等待，兩周后再做決定。

11. 有關DMSO的一些注意事項：

(1) DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內的離子濃度、減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷程度。

(2) DMSO在溶解過程中會放熱，應先與培養基混勻后再加血清，同時凍存液好好提前配置，DMSO現配對細胞的毒性可能更大；

(3) 復蘇時，要離心去除DMSO，并用新鮮的培養基洗滌1-2次，注意離心的時候速度不要太快。

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