生物試劑銷售中心Hep3B細(xì)胞 |現(xiàn)貨Hep3B|附STR鑒定

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生物試劑銷售中心Hep3B細(xì)胞 |現(xiàn)貨Hep3B|附STR鑒定，細(xì)胞培養(yǎng)方法步驟：

一、傳代前準(zhǔn)備  編輯  張昕

1.  預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.  用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.  正確擺放使用的器械，保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。

4.  點燃酒精燈，注意火焰不能太小。

5.  準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。

6.  取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

7.  從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞，注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.  打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

9.  稍微搖搖，然后從對側(cè)倒掉培養(yǎng)液，用酒精棉球擦拭zui后一滴，注意要靠近酒精燈。

二、胰蛋白酶消化

1.  加入消化液：用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。

2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度，然后讓其停止消化。

3.  倒掉消化液加入培養(yǎng)液，棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液。注意要在對測加入培養(yǎng)液。

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三、吹打分散細(xì)胞

1.  吹打制懸：用吸管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.  吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10 ml 離心管中。

3.  平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以1 000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。

4.  棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2 ml 培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

四、分裝稀釋細(xì)胞

1.  分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2~3個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×10⁵/ml，zui后要做好標(biāo)記。

五、傳代培養(yǎng)

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25%時為一個+，占50%為++，占75%時為+++。

生物試劑銷售中心Hep3B細(xì)胞 |現(xiàn)貨Hep3B|附STR鑒定，細(xì)胞培養(yǎng)注意事項：

每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了 ，培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些慘痛經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?

1. 嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。

　　3. 有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測。

　　4. 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換 (滅菌水加進去)。

　　5. 晚上離開的時候給細(xì)胞房照紫外，超凈臺是用完就開。

6. 的是同一時間就你一個人在用細(xì)胞房在養(yǎng)細(xì)胞。

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