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膠體金檢測(cè)相關(guān)知識(shí)了解

來源:北京維德維康生物技術(shù)有限公司   2017年08月18日 09:29  
膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù),是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù),有其*的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。同時(shí)在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能例用到。

膠體金一般在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷,會(huì)與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合,一般稱這種結(jié)合叫靜電結(jié)合,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,它還可以與許多其它生物大分子結(jié)合,如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性,從而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。
 
膠體金標(biāo)記技術(shù),實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。用于膠體金標(biāo)記的蛋白必須要經(jīng)過前處理,其目的在于:
 
1、去除高濃度的鹽分,高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結(jié)合,或?qū)е履z體金粒子的凝聚,這一步往往采用低濃度緩沖液來進(jìn)行。
2、使蛋白分子盡量分散為單體,凍干蛋白或高濃度蛋白溶液中蛋白分子往往凝聚為多聚體大分子,可同時(shí)與多個(gè)膠體金粒子結(jié)合,影響標(biāo)記的靈敏度和定量分析。
3、使蛋白具有適當(dāng)?shù)姆肿恿俊5鞍追肿恿窟^小(30 kD),形成的蛋白復(fù)合體往往是不穩(wěn)定,可短時(shí)間內(nèi)失活。而分子量過大時(shí),被認(rèn)為影響探針的靈敏度,特別是已知蛋白的結(jié)構(gòu)與活性中心的情況下,去除對(duì)活性影響的結(jié)構(gòu)部分是提高標(biāo)記靈敏度,延長(zhǎng)探針壽命(防止凝集)的有效辦法。把分子量過小的蛋白與其它蛋白(如牛血清蛋白等)結(jié)合后,能制備出穩(wěn)定性更強(qiáng)的探針。

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