FRH-020細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

生物試劑銷售中心細(xì)胞庫提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系，涉及人類，大鼠、小鼠、鳥類、倉鼠、魚類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長鼻袋鼠等。

產(chǎn)品名稱：FRH-020細(xì)胞

中文名稱：人膽管癌細(xì)胞

種屬：人

來源：膽管癌

培養(yǎng)條件：DMEM

生長狀態(tài)：貼壁

FRH-020細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異，有時因寄贈、交換和購買，培養(yǎng)細(xì)胞從一個實驗室轉(zhuǎn)運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在－70℃以下時，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于*停止?fàn)顟B(tài)，故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。

一、細(xì)胞的凍存：為避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。

有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細(xì)胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：

包含10％甘油的*培養(yǎng)基，

包含10％二甲基亞砜（DMSO）的*培養(yǎng)基，

50％ 細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％甘油的新鮮培養(yǎng)基，或

50％ 細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。

對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：

50％ 細(xì)胞條件無血清培養(yǎng)基和50％包含有7.5％二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基，或

包含有7.5％二甲基亞砜和10％細(xì)胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。

FRH-020細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

CEK  雞胚腎細(xì)胞          雞     胚腎         DMEM     貼壁

NCI-H1770       人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞     人     非小細(xì)胞肺癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性     1640         懸浮

NCI-H1092       人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞         人     非小細(xì)胞肺癌；骨髓轉(zhuǎn)移；男性         1640         貼壁

KYSE30     人食管鱗癌細(xì)胞     人     食管鱗癌；男性     EMEM      貼壁

Mv-4-11   人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞         人     急性單核細(xì)胞白血病；男性         1640         懸浮

RPMI8226        人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     人     漿細(xì)胞骨髓瘤；男性     1640         懸浮

NALM-6   人急性B淋巴白血病細(xì)胞     人     急性B淋巴細(xì)胞白血病；男性     1640         懸浮

Nthy-ori3-1       人甲狀腺正常細(xì)胞         人     甲狀腺；SV40轉(zhuǎn)化；女性    F12K          貼壁

FHC  人正常結(jié)直腸粘膜細(xì)胞         人     胎兒；結(jié)腸；自發(fā)永生；男性     1640         貼壁

FLS   大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞         大鼠         滑膜         DMEM     貼壁

HFL  人成纖維樣滑膜細(xì)胞     人     滑膜         1640         貼壁

HLEB3      人晶狀體上皮細(xì)胞系     人     晶狀體；Ad12-SV40轉(zhuǎn)化；男性  DMEM     貼壁

HN13        人口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞         人     舌鱗癌；女性         EMEM      貼壁

RLE-6TN   大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞     大鼠         肺；上皮細(xì)胞；Fischer 344  DMEM     貼壁

PA-TU-8988S    人胰腺癌細(xì)胞         人     胰腺癌；女性         DMEM     貼壁

HEEC        人正常食管上皮細(xì)胞     人     食管；上皮細(xì)胞     1640         貼壁

MES-SA    人子宮肉瘤細(xì)胞     人     子宮肉瘤；女性     McCoy’s    貼壁

MCFs        小鼠心肌成纖維細(xì)胞     小鼠         心肌；成纖維細(xì)胞         1640         貼壁

EHEB        人慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     B細(xì)胞白血病；女性      1640         懸浮

SNK6         人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞       人     NK/T細(xì)胞淋巴瘤；男性        1640         懸浮

PIG1          正常人皮膚黑色素細(xì)胞         人     皮膚；黑色素細(xì)胞；HPV16轉(zhuǎn)化；男性     1640         貼壁

hTERT-RPE1     人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞         人     視網(wǎng)膜色素上皮；hTERT永生；女性 DMEM     貼壁

ARPE-19/APRE-19    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞         人     視網(wǎng)膜色素上皮；自發(fā)永生         DMEM     貼壁

HO8910PM      人卵巢癌細(xì)胞         人     卵巢癌；女性         1640         貼壁

IPI-2I         豬回腸上皮細(xì)胞  豬     腸；上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化    1640         貼壁

RT4-D6P2T       大鼠神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞     大鼠         惡性神經(jīng)鞘瘤；BDIX     DMEM     貼壁

HUVEC     人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞         人     臍靜脈；內(nèi)皮細(xì)胞         DMEM     貼壁

HTR8-Svneo     人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞     人     絨毛膜滋養(yǎng)層         1640         貼壁

KG-1a        人急性骨髓白血病細(xì)胞         人     急性髓系白血病；男性         IMDM      懸浮

OCI-AML3         人急性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞         人     急性髓系白血病；男性         IMDM+20%     懸浮

1、懸浮細(xì)胞

計數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞，使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細(xì)胞。

以1×10⁷到5×10⁷細(xì)胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞，或者以0.5×10⁷到1×10²⁷在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細(xì)胞。

分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

細(xì)胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。

2、貼壁細(xì)胞

使用分離試劑從基層分離細(xì)胞，分離時盡可能溫和，使對細(xì)胞的損傷減少到zui小。

在*生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細(xì)胞，確定有活力細(xì)胞數(shù)。

以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細(xì)胞。

以5×10⁶到1×10⁶細(xì)胞/ml密度，在凍存液中懸浮細(xì)胞。

分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

細(xì)胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。

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