HCMEC(BL12-H)細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱(chēng)：HCMEC(BL12-H)細(xì)胞

中文名稱(chēng)：人結(jié)腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞

種屬：人

來(lái)源：結(jié)腸微血管；內(nèi)皮細(xì)胞

培養(yǎng)條件：DMEM

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁

生物試劑銷(xiāo)售中心細(xì)胞庫(kù)提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來(lái)源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系，涉及人類(lèi)，大鼠、小鼠、鳥(niǎo)類(lèi)、倉(cāng)鼠、魚(yú)類(lèi)、貓類(lèi)、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長(zhǎng)鼻袋鼠等。

注意事項(xiàng)如下：

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。

2 對(duì)于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開(kāi)封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

3 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和本公司技術(shù)部溝通交流。

HCMEC(BL12-H)細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程

一、準(zhǔn)備工作 準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

二、取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。

理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。

HCMEC(BL12-H)細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

bEnd.3      小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞         小鼠         腦微血管；內(nèi)皮細(xì)胞；BALB/c     DMEM     貼壁

C4-2 人前列腺癌細(xì)胞     人     前列腺癌；左鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性     1640         貼壁

C4-2B       人前列腺癌細(xì)胞     人     前列腺癌；左鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性     F12K          貼壁

DOK 人口腔黏膜癌前病變細(xì)胞     人     口腔異常增生；男性     1640         貼壁

SCC-15     人舌磷癌細(xì)胞         人     舌鱗癌；男性         EMEM      貼壁

DT40         雞淋巴瘤細(xì)胞         雞     淋巴瘤； Hy-Line SC      1640         懸浮

RBE4         大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞   大鼠         2型腺病毒轉(zhuǎn)化；SD大鼠     1640         貼壁

SCC-090   人口腔鱗癌細(xì)胞     人     舌鱗癌細(xì)胞；男性         McCoy’s    貼壁

SCC-9        人舌鱗癌細(xì)胞        人     舌鱗癌細(xì)胞；男性         EMEM      貼壁

SCC-4        人舌鱗癌細(xì)胞         人     舌鱗癌細(xì)胞；男性         EMEM      貼壁

SCC-25     人舌鱗癌細(xì)胞         人     舌鱗癌細(xì)胞；男性         EMEM      貼壁

THLE-2     SV40轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞        人     肝上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；男性    1640         貼壁

THLE-3     SV40轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞        人     肝上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化        1640         貼壁

CAL-51     人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性     DMEM     貼壁

CAL-148   人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性     EMEM      貼壁

ZYM-DIEC02    豬小腸上皮細(xì)胞     豬     小腸上皮細(xì)胞         1640         貼壁

G422         小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞         小鼠         腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞         DMEM     貼壁

BMSC/hBMSCs         人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞     人     骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞         DMEM     貼壁

VCaP         人前列腺癌細(xì)胞     人     前列腺癌；男性     DMEM     貼壁

VX2  兔間變表皮鱗癌瘤株     兔     表皮鱗癌         EMEM      貼壁

CF-1MEF  小鼠胚胎成纖維細(xì)胞     小鼠         胚胎；成纖維細(xì)胞；CF-1      DMEM     貼壁

AR42J       大鼠胰腺外分泌細(xì)胞     大鼠         胰腺外分泌細(xì)胞；Wistar      DMEM     貼壁

PMVEC     大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞         人     肺微血管；內(nèi)皮細(xì)胞     DMEM     貼壁

RGM-1     正常胃粘膜上皮細(xì)胞     大鼠         胃黏膜；上皮細(xì)胞；Wistar F12   貼壁

KMS11      人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     人     多發(fā)性骨髓瘤         IMDM      懸浮

KMS26      人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     人     多發(fā)性骨髓瘤         IMDM      懸浮

SKM-1       人骨髓增生異常綜合征細(xì)胞         人     骨髓增生異常綜合征     IMDM      懸浮

HPBALL    人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 1640         懸浮

BJAB         人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 人     Burkitt's淋巴瘤      1640         懸浮

GES-1        人胃粘膜細(xì)胞         人     胃粘膜；SV40轉(zhuǎn)化        1640         貼壁

Toledo      人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤；女性         IMDM      懸浮

9L     大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞     大鼠         膠質(zhì)瘤；Fischer 344      DMEM     貼壁

MLE-12    小鼠肺上皮細(xì)胞     小鼠         肺；上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；FVB/N      DMEM     貼壁

KBM5       人慢性髓白血病細(xì)胞     人     慢性髓白血病；女性     IMDM      懸浮

VSC4.1     脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元瘤細(xì)胞系     人     神經(jīng)元瘤         DMEM     貼壁

HIC  人小腸癌細(xì)胞系     人     小腸癌     1640         貼壁

LN-18        人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞         人     膠質(zhì)瘤；男性         DMEM     貼壁

Kupffer     肝枯否細(xì)胞                       1640或DMDM       貼壁

SNU475    人肝癌細(xì)胞     人     肝癌；男性     1640         貼壁

T98G         人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞     人     膠質(zhì)瘤；男性         DMEM     貼壁

HMEC-1   人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株     人     微血管；內(nèi)皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；男性        1640         貼壁

NCTC1469        小鼠正常肝細(xì)胞     小鼠         肝；自發(fā)永生；C3H/An         DMEM     貼壁

HIEC         正常人腸上皮細(xì)胞         人     腸；上皮細(xì)胞         1640         貼壁

HPDE6-C7(H6C7)     人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞     人     胰腺導(dǎo)管；上皮細(xì)胞；HPV16轉(zhuǎn)化；女性          DMEM     貼壁

RGC-5       小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞         小鼠         視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞         DMEM     貼壁

hRMECs   人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞     人     視網(wǎng)膜微血管；內(nèi)皮細(xì)胞     DMEM     貼壁

MN9D      小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞     小鼠         多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞     EMEM      貼壁

HCS-2/8     人軟骨肉瘤細(xì)胞     人     軟骨肉瘤；男性     McCoy’s    貼壁

RTE  大鼠氣管上皮細(xì)胞         大鼠         氣管；上皮細(xì)胞     DMEM     貼壁

為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題，公司特做以下建議：

1）細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中，請(qǐng)勿打開(kāi)自封袋；拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體，切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

2）進(jìn)入生物安全柜前，打開(kāi)自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開(kāi)封口膜后，用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開(kāi)瓶蓋（如是貼壁細(xì)胞，請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

HCMEC(BL12-H)細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析