簡介

MTT實驗，全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法，是一種常用于檢測細胞存活和生長的體外實驗方法。該方法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源性MTT還原成不溶于水的藍紫色結晶甲臜（Formazan），而死細胞缺乏這種功能。通過測定溶液中甲臜的光吸收值，可以間接反映活細胞的數量。MTT實驗因其靈敏度高、經濟實用而被廣泛應用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等領域。

實驗步驟

  1.細胞培養：將對數生長期的細胞接種到96孔板中，并在適宜的條件下培養至細胞單層鋪滿孔底。

  2.藥物處理：向含有細胞的孔中加入不同濃度的測試藥物，并繼續培養一段時間。

  3.MTT添加：向每個孔中加入MTT溶液，繼續培養以允許活細胞將MTT還原。

  4.終止培養：停止培養后，去除孔內的培養液，并用二甲基亞砜（DMSO）溶解甲臜結晶。

  5.比色測定：在酶聯免疫檢測儀上測定各孔的吸光度值，通常在490nm或570nm波長處進行測量。

  6.數據分析：根據吸光度值計算細胞的相對生存分數或抑制率，并進一步分析藥物的效力。

注意事項

  1.MTT溶液應現配現用，并在避光條件下保存。

  2.實驗過程中應避免交叉污染，并注意使用無菌技術。

  3.在離心和吸液步驟中，應輕柔操作以保護細胞。

  4.溶解結晶物時，應充分振蕩以確保wanquan溶解。

  5.實驗結果的線性范圍通常建議在OD值0-0.7之間。

  6.MTT法只能用來檢測細胞的相對數和相對活力，不能直接測定細胞的絕對數。