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氣相色譜法檢測有機酸
[關鍵詞] 繼發齲;牙本質;有機酸;氣相色譜法
[摘要] 目的利用氣相色譜法對繼發齲牙本質中的有機酸進行定性和定量分析，探討繼發齲形成原因。方法收集45顆牙齒繼發齲牙本質標本，用25g/L偏磷酸溶解并勻化，低溫離心，取上清液加入100g/L高碘酸混勻后進樣作樣品乳酸分析，其他有機酸直接進樣上清液分析。結果大多數繼發齲牙本質標本中檢測到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸存在，少數標本中檢測到戊酸。測得的有機酸含量由高到低依次為甲酸 （23.27±4.36）g/L;乙酸（3.65±1.49）g/L;丙酸（2.38±0.48）g/L;乳酸（1.25±1.20）g/L;丁酸 （0.89±0.36）g/L和戊酸（0.05土0.13）g/L。結論繼發齲牙本質中的有機酸以甲酸、乙酸和丙酸為主，占所有有機酸組成的93%，主要是細菌利用齲損中膠原等內源性物質產生。
[關鍵詞] 繼發齲;牙本質;有機酸;氣相色譜法
繼發齲的發生與多種因素有關。微生物產生的有機酸在繼發齲發生、發展過程中具有重要作用。我們利用氣相色譜法對繼發齲牙本質中的有機酸組成和含量進行研究，以期進一步了解繼發齲的發病機制。
1 材料和方法
1.1 儀器與試劑
普瑞GC-7800型氣相色譜儀，PR-3000型色譜工作站，不銹鋼螺旋柱2mX 3mm，填充GDX—101（80—100目）。
偏磷酸（AR），高碘酸（AR），乙醛（AR），雙蒸水。標準品乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸均為分析純，用時以25g/L偏磷酸稀釋至0.25mol/L。
1.2 色譜條件
氣體流速：載氣（N2）50ml/min，H2 45 ml/min，空氣500ml/min。溫度：測乳酸時柱溫140℃，汽化室溫度150℃，氫焰檢測器溫度160℃;測其他有機酸時柱溫190℃，汽化室溫度220℃，氫焰檢測器溫度220℃，衰減：0，量程：10，紙速：3mm/min。
1.3定性與定量
利用保留時間一致和峰加高法定性。在樣品中加入標準酸，根據峰高是否增加定性。用外標法定量測定，以單點校正法，用峰面積計算有機酸含量。
1.4標本的收集
收集30例患者（年齡22～60歲）的45顆牙齒繼發齲牙本質標本進行實驗。患牙均具有銀汞合金或樹脂充填體，或金屬全冠修復體。標本的收集采用兩種方法進行：①在患牙治療前收集：將患牙區行阻滯或浸潤麻醉，用刮匙去除表面菌斑及污物，去除原充填體或修復體，干棉球隔離患牙，氣吹干牙表面，挖匙挖取軟化牙本質;②從拔除的牙齒上收集：拔除患繼發齲的牙齒，刮匙去除表面菌斑及污物，縱向劈開牙齒，去除原充填體或修復體后，用挖匙收集所有齲洞內的軟化牙本質。繼發齲的判斷參照Hojo等「1」描述的方法。
5例正常牙本質標本取自己萌出的無齲阻生第三磨牙作對照，將取下的正常牙本質塊用金剛砂車針磨成碎片，在研缽中研碎。
標本收集后立即稱重，放置于具蓋密封的試管中—20℃貯存備測。
1.5樣品處理和分析
將標本用25g/L的偏磷酸配成150g/L的混懸液，勻化5 h后，10 000 r/min，4℃離心10min。取5ul上清液加5ul 100g/L的高碘酸混合后進樣1ul，在上述色譜條件下作樣品乳酸分析，其他有機酸直接進樣1/ul上清液分析。
2 結果
2.1 精密度與準確性測定結果
對一已知含量樣品作標準加入回收實驗，并重復測定5次，測其含量，濃度差即為檢出量。標本中甲酸、乙酸、丙酸的回收率均在96%以上，因樣品中乳酸、丁酸和戊酸含量較少，因此誤差較大，但回收率仍大于92%。乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸的變異系數（%）分別為2.8、1.3、3.0、2.5、 3.2和3.9，結果表明本法能獲得滿意的精密度和準確性。