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安譜實驗用數據說話——普洱茶中黃曲霉毒素，嘔吐毒素大揭秘

閱讀：2350 發布時間：2017-9-20

　　近日，打假人士方舟子，質疑普洱茶中含有黃曲霉毒素，嘔吐毒素等致癌物質，引起茶界一片嘩然，各界人士及網友們眾說紛紜，同時方舟子也列舉出廣州疾控和南昌大學碩士論文對普洱茶相關毒素的檢測結果，所采集樣品均呈陽性。面對如此情況，聚光科技下屬子公司上海安譜實驗科技股份有限公司（以下簡稱“安譜實驗”）立即安排實驗，采用液相色譜法對普洱茶中的黃曲霉毒素，嘔吐毒素進行了檢測，用詳實的數據、譜圖來探究普洱茶中所含毒素的真實情況。

樣品1：在茶葉商店里選擇了存放長達9年的生茶

樣品2：經過發酵技術發酵過的熟茶

一、普洱茶中黃曲霉毒素的檢測（參考GB 5009.22-2016 食品中黃曲霉毒素的檢測第三法液相色譜-柱后衍生法）
　　樣品前處理
　　準確稱取2 g 粉碎的茶葉試樣，置于50 mL 離心管中，加入10 mL( 乙腈+ 水) 溶液（84+16），渦旋3min，超聲15min，4000rpm離心8min。取4mL 上清液，加12mL PBS 緩沖溶液稀釋，混勻，待凈化
　　加標溶液：CDGG-116870-03 (o2si 品牌) 黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 混標 1:0.3:1:0.3ppm 25uL
　　小柱操作
　　黃曲霉毒素免疫親和柱(SBHL-20-0383,Beacon 品牌) 恢復室溫后，讓柱內緩沖液流完。
　　上樣：控制流速1d/s
　　淋洗：5mL PBS 淋洗，5mL 水淋洗，淋洗完后抽干，
　　洗脫：用2mL 甲醇洗脫，控制流速1d/s 50℃氮吹到近干，用流動相定容到1mL，過濾，待進樣。
　　色譜條件
　　a) 流動相：A：水,B：甲醇/ 乙腈(16+16)
　　b) 色譜柱：CNW Athena C18-WP 液相色譜柱 (4.6*150mm,5um)
　　c) 流速：1.0mL/min
　　d) 柱溫：40℃
　　e) 進樣體積：20μL
　　f) 檢測波長：激發波長360nm; 發射波長440nm
二、普洱茶中嘔吐毒素的檢測（參考GB 5009.111-2016 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測定第二法免疫親和層析凈化液相色譜法）
　　樣品前處理
　　取2g 茶葉，加入20mL 去離子水，渦旋1min，超聲20min，4000rpm 離心8min，取上清液2mL 過柱。
　　加標溶液: CDGG-014445-06 (o2si 品牌) 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇( 嘔吐毒素) 標準品 200 ug/mL 于甲醇加標50uL
　　小柱操作
　　嘔吐毒素免疫親和柱（SBHL-20-0347,Beacon 品牌）恢復室溫后，讓柱內緩沖液流完
　　上樣：2mL 上樣液加到小柱上面，控制流速1d/s
　　淋洗：5mL PBS 溶液洗滌，5mL 水洗滌
　　洗脫：2ml 甲醇洗脫，控制流速1d/s
　　甲醇氮吹近干后，加流動相定容到1mL。渦旋, 過濾, 待上機檢測。
　　色譜條件
　　a) 流動相: 甲醇：水（2:8）
　　b) 色譜柱: CNW Athena C18-WP 液相色譜柱(4.6*150mm,5um)
　　c) 流速:1.0mL/min
　　d) 柱溫:35℃
　　e) 進樣體積:20μL
　　f) 檢測波長:218nm
三、實驗譜圖

圖1：黃曲霉毒素10ppb 標準品譜圖（黃曲霉檢測）

圖2：生茶基質譜圖（黃曲霉檢測）

圖3：熟茶基質譜圖（黃曲霉檢測）

圖4：生茶基質加標10ppb 譜圖（黃曲霉檢測）

圖5：熟茶基質加標10ppb 譜圖（黃曲霉檢測）

圖6：嘔吐毒素1ppm 標準品譜圖（嘔吐毒素檢測）

圖7：生茶基質譜圖（嘔吐毒素檢測）

圖8：熟茶基質譜圖（嘔吐毒素檢測）

圖9：熟茶基質加標1ppm 譜圖（嘔吐毒素檢測）

四、實驗數據
　　黃曲霉毒素

目標物	生茶基質	熟茶基質	生茶加標10ppb	熟茶加標10ppb	生茶加標回收率%	熟茶加標回收率%
黃曲霉 G2 （ng/mL）	0	0	3.9	5.9	39%	59%
黃曲霉G1 （ng/mL）	0	0	7	6.9	70%	69%
黃曲霉B2 （ng/mL）	0	0	8	8.3	80%	83%
黃曲霉B1（ng/mL）	0	0	8.7	8.1	87%	81%

　　嘔吐毒素

目標物	生茶基質	熟茶基質	熟茶加標1ppm	熟茶加標回收率 %
嘔吐毒素	0	0	0.92ppm	91.2

五、分析討論
　　1、從數據上我們可以看出，市面上購買的普洱茶生茶和熟茶均沒有檢測到黃曲霉毒素和嘔吐毒素。但是限于我們樣品來源有限，從我們檢測的樣品來看，正常渠道購買的普洱茶一般都沒有問題，大家可以放心飲用。
　　2、黃曲霉毒素B2、B1 的加標回收率可以達到80% 以上，但是G2、G1 平均只有40-70%，不是很穩定，后來經過排查，發現G2、G1極易降解，隔一段時間進樣，峰面積就會降低很多，相對來說，B2，B1的回收率比較穩定，另外食品中zui容易污染，關注度zui高的也是黃曲霉毒素B1，并且是毒性zui強，致癌性zui強的毒素。嘔吐毒素的回收率非常穩定，達到90%以上。
　　3、總體來說，免疫親和層析液相色譜-柱后光化學衍生法檢測普洱茶中黃曲霉毒素，免疫親和層析凈化液相色譜法檢測嘔吐毒素是非常可靠的方法，目前國家對黃曲霉B1的限值，玉米制品為20ppb，稻谷及其制品10ppb，小麥及其制品5ppb，嘔吐毒素在玉米小麥中的限值為1ppm，根據國標方法，黃曲霉毒素的定量限達0.5ppb，嘔吐毒素的定量限可以達到0.2ppm，均低于國家的限值。
六、黃曲霉毒素和嘔吐毒素檢測實驗耗材包

貨號	名稱	規格	品牌
SBHL-20-0383	美國Beacon黃曲霉毒素總量免疫親和柱（B1，B2，G1，G2)	3mL，20支/盒	Beacon
SBHL-20-0347	美國Beacon嘔吐毒素免疫親和柱	3mL，20支/盒	Beacon
CDGG-116870-17-1ml	黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混標（GB/T 5009.22-2016）標準品	1 mg/L于乙腈， 1 ml于Certan Vial	O2SI
CDGG-116870-03	黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混標（GB/T 5009.22-2016）方法2方法3 標準品	不同濃度于乙腈， 1 ml于Certan Vial	O2SI
CDGG-014445-06	脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素) 標準品	200 ug/mL于甲醇，1mL	O2SI
LAEQ-461572	Athena C18-WP 液相色譜柱	4.6*150mm，5um	CNW
SBHL-YQ-01	凱斯科光化學衍生器	PCS	凱斯科
SBEQ-CR0002	SPE 小柱連接件【1，3，6mL】，PP 材質	12 個/ 包	CNW
SBEQ-CR1012	CNW 12 位固相萃取真空裝置	12 位	CNW
SCAA-114	親水PTFE針式濾器	13mm*0.22um， 100 只/ 罐	ANPEL
SCAA-113	親水PTFE針式濾器	13mm*0.45um， 100 只/ 罐	ANPEL
QBAA-002012	2ml 無針注射器	100 只/ 包	ANPEL
ABEQ-3300002-25	CNW 50ml 尖底離心管	25/袋	CNW
ADEQ-2600111	3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未滅菌	500/ 箱	CNW
VAAP-32009E-1232A-100	CNW 9mm 透明螺紋口自動進樣瓶( 帶刻度、書寫)	2ml，12*32mm， 9mm，100 只/ 盒	CNW
VEAP-5394-09FRB-100	兼容Agilent 的9mm 藍色開孔擰蓋、含PTFE/ 橡膠隔墊，Bond	100/ 袋	CNW
CAEQ-4-003306-4000	HPLC 級別通用型乙腈( 也適用于生化，無水分析領域)	4L	CNW
CAEQ-4-003302-4000	HPLC級甲醇，梯度級	4L	CNW
EOFO-945605	Talboys 基本型旋渦混合器，230V/150W	外形尺寸： 20.3×10.2×14.0cm，包裝重量：5.3kg	Talboys
EDAA-2101TH	超聲波清洗器，100W ( 帶加熱功能）	槽內尺寸: 300150100mm，4L	ANPEL

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