當遇到色譜泵的柱壓的問題,使用者可能反應(yīng)是色譜柱出了問題。這里說明一下,并不一定是色譜柱的問題,也可能是儀器系統(tǒng)出現(xiàn)了問題。
1.首先需要確認是儀器系統(tǒng)問題還是色譜柱問題。將色譜柱更換為兩通,開啟色譜泵后,若系統(tǒng)反壓高,說明儀器系統(tǒng)存在問題,若系統(tǒng)反壓歸零或很小,說明色譜柱存在問題。
2.若確認是色譜柱的問題導(dǎo)致柱壓升高時,造成色譜柱柱壓高的原因包括物理顆粒堵塞或化學(xué)污染物。
3.當儀器系統(tǒng)存在壓力高的問題時,需要分段排查,可按照柱后端管路、柱前端管路、進樣閥、色譜泵的順序來依次確認是哪里的問題導(dǎo)致,并進行清洗或更換零部件。
色譜泵的柱壓高,情況相對較復(fù)雜,下面我們重點講述:
I、樣品沉淀
樣品溶劑與流動相溶劑不一致時,樣品進入色譜柱中時可能會因溶解度下降而出現(xiàn)沉淀,造成柱壓升高。
II、鹽析
使用高濃度緩沖鹽溶液做流動相時,流速設(shè)置過低,導(dǎo)致流動相中鹽成分析出;或者使用高濃度緩沖鹽流動相后液相色譜系統(tǒng)(包括色譜柱)沖洗不*,從而導(dǎo)致緩沖鹽溶液流動相中的鹽成分殘留在色譜柱中,再次使用時會出現(xiàn)柱壓高的現(xiàn)象。
III、更換流動相前未充分沖洗系統(tǒng)
當更換流動相時,未*沖洗系統(tǒng),致使不同性質(zhì)、互不相溶的流動相存在于一個體系中,也容易導(dǎo)致柱壓升高。對于不同性質(zhì)、互不相溶的流動相可事先用混溶溶劑(比如異丙醇)沖洗系統(tǒng)再更換新的流動相;在使用含鹽流動相時,須先用不含鹽高比例水相(e.g.有機相:水=10:90)沖洗過渡色譜系統(tǒng),以防止鹽析堵塞系統(tǒng)而導(dǎo)致柱壓升高。
IV、色譜柱篩板堵塞
較容易導(dǎo)致色譜柱柱壓升高的原因之一為色譜柱篩板或柱頭發(fā)生了堵塞,這往往是由于流動相沒有過濾或者雖已過濾但過濾方法不當(比如使用了孔徑過大的濾膜、濾膜損壞、濾膜材質(zhì)選擇不當?shù)龋?dǎo)致固體雜質(zhì)顆粒滯留在篩板上造成的。
V、其它
色譜系統(tǒng)故障導(dǎo)致的其它堵塞也會表現(xiàn)為柱壓高,比如:液相泵單向閥堵塞、管路堵塞等。此類情況可以通過拆下色譜柱觀察壓力是否恢復(fù)正常的方法進行排查。
色譜泵的柱壓問題具體預(yù)防和解決措施:
I.測試樣品溶劑與流動相兼容性以及樣品過濾膜過濾;
II.確認方法參數(shù)準確合理;
III.分析強保留樣品或含緩沖鹽的流動相體系,及時沖洗色譜柱;
IV.引入預(yù)柱或在線過濾器,減少化學(xué)吸附與物理顆粒對色譜柱的污染;
V.更換液相單向閥或堵塞管路。