国产一级a毛一级a看免费视频,久久久久久国产一级AV片,免费一级做a爰片久久毛片潮,国产精品女人精品久久久天天,99久久久无码国产精品免费了

產品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
廣州譽維生物科技儀器有限公司>技術文章>WB過程中如何保證的蛋白轉印

技術文章

WB過程中如何保證的蛋白轉印

閱讀:290          發布時間:2015-4-27

WB過程中從SDS-PAGE膠上轉移蛋白至膜上是非常關鍵的步驟!優化轉移時間往往需要實驗多次,下面就講幾條關于如何保證蛋白*轉移的小技巧,適合新手參考:

使用預染的marker 預染marker不僅能夠直觀的觀察到跑膠情況,而且在轉移過程中也是很好的工具,在完成印跡后觀察膜上的 marker ,看是否所有條帶都已經轉移至膜上。

在轉印裝置中加兩塊膜 小分子量的蛋白轉移的比較快,而為保證大分子蛋白的轉印,長時間的轉印可能使小分子蛋白透過膜,因此,可以加入兩塊膜,如果能在第二塊膜上檢測到小分子蛋白,說明轉印時間過長。

在轉印后對膠染色 如果轉印時間不夠優化,通過對膠染色,在膠上能夠觀察到未轉移*的蛋白,這種情況在轉印大分子蛋白是常見,使用銀染或者考馬斯亮藍的方法都可以。

二、Western blot轉印的優化

SDS凝膠中進行Western蛋白轉印的優化需要對一系列參數進行考慮。目的是轉印所有凝膠上的蛋白并將其定量地轉移到轉印膜上。進行轉印需要一定程度的優化,尤其是對于大分子量和小分子量蛋白。

轉印后,凝膠上應不殘留或殘留很少的蛋白。可以在轉印后進行染色進行檢測。轉移出凝膠的蛋白應該僅在接觸凝膠的膜的一面可見。如果有懷疑,在轉印時使用第二個"支持膜",你可以在轉膜后染色,以檢查是否有穿膜的跡象。如果發現蛋白殘留在凝膠上而且膜的結合性很差,可以考慮下列因素:

SDS vs 甲醇

在多數轉印實驗步驟中都使用SDS和甲醇。但兩者對于成功的轉印有相反的作用,需要根據欲轉印蛋白的性質加以優化。

SDS對于蛋白的遷移是必要的,尤其有助于大分子量蛋白從凝膠上的轉移。但由于膜結合需要疏水相互作用,SDS過多會抑制結合,尤其對于硝酸纖維素膜。作為一個一般性的規則,如果膜的結合力有效,但蛋白仍舊殘留在凝膠上,在轉印緩沖液中加入 0.1SDS會促進*轉印。但另一方面,甲醇通過在蛋白上剝離SDS,促進蛋白和膜的疏水結合。一般在轉印緩沖液中加入20%的甲醇會增加硝酸纖維素膜的結合能力。

凝膠濃度

丙烯酰胺濃度越低,蛋白越容易轉移下來。選擇可以分離蛋白的濃度zui低的凝膠。梯度膠適用于轉印一系列不同大小的蛋白,因為凝膠的孔與不同大小的蛋白匹配良好。

凝膠厚度

蛋白比較易于從薄膠上轉移下來,所以如果上樣體積允許,使用1.0mm厚的膠取代1.5mm的膠。

電場(電壓×時間)

如果電壓過低而且轉印時間過短,部分蛋白會殘留在凝膠上。如果電壓過高,小蛋白會在結合到膜上前透膜而出。如果按建議的條件轉印后有蛋白殘留在膠上,增加電壓可能會有幫助,但不要超過5V

膜的類型

蛋白結合到硝酸纖維素膜上主要通過疏水鍵。PVDF膜比硝酸纖維素膜更疏水,在轉印過程中結合蛋白更緊密,可以耐受更多的SDS。目前,PVDF膜一般比硝酸纖維素膜需要更嚴謹的封閉條件,其適用于蛋白印跡。尼龍膜通過疏水和靜電相互作用結合,其SDS耐受度甚至高于PVDF膜,但也需要更嚴謹的封閉條件,主要建議用于Northern Southern

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

對比框

產品對比 產品對比 聯系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
020-85541890
在線留言
主站蜘蛛池模板: 于都县| 商河县| 宁阳县| 静海县| 治多县| 田东县| 屏东县| 桦甸市| 宁波市| 鄂托克旗| 上虞市| 沙河市| 临澧县| 都兰县| 赤壁市| 武隆县| 天水市| 朔州市| 江西省| 得荣县| 广饶县| 慈利县| 康马县| 岑溪市| 乳源| 达日县| 南充市| 朝阳市| 临武县| 甘孜县| 巩义市| 杭锦旗| 嘉峪关市| 札达县| 青海省| 江陵县| 格尔木市| 海淀区| 大洼县| 墨脱县| 晋江市|