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Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense

MCE 國際站：Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-P2962

CAS：80146-85-6

中文名稱：轉谷氨酰胺酶

Synonyms：TG

存儲條件：請將產品存放在分析證書上推薦的條件下。

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense (TG) 是一種在蛋白質分子之間形成交聯的酶。Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense 將蛋白質和肽附著到小分子、聚合物、表面、DNA 以及其他蛋白質上。Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense 在食品上廣泛用于肉類、魚類、乳制品和烘焙工業。

體外：Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense 介導的位點特異性偶聯抗體[3] (1) 抗體功能化：將 Q 標簽抗體與30 U/mg 的 Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense 和疊氮-PEG2-胺 (每 1 摩爾Q標簽使用 200 摩爾疊氮-PEG2-胺) 混合，在 PBS 緩沖液中溫和攪拌過夜。功能化后的抗體通過蛋白 A 樹脂進行純化。 (2) 標記效率檢測：為了控制抗體的標記效率，將染料 DBCO-dPEG12-羧基熒光素以 1:5 的比例加入到抗體中，在室溫下孵育 3 小時。使用 SDS-PAGE 結合 Alexa 488 濾光片 (520 nm) 和考馬斯亮藍染色分析偶聯的熒光化合物。 (3) 抗體與脂質體的偶聯：在第二步中，將不同量的唇質體與 20 μg 的功能化 Q 標簽抗體在 PBS 緩沖液中混合，并在室溫下孵育過夜。調整樣品體積至最終工作體積為 100 μL。 Tissue Transglutaminase 用于檢測 T 細胞增殖實驗[4] (1) 在 96 孔板中用完-全 RPMI 和經過熱滅活的 10% 人 AB 血清培養 PBMC 細胞，每孔 1×105 細胞。加入 12 μg/mL 肽，50 μg/mL 經胰凝乳蛋白酶消化的麥醇溶蛋白，或磷酸鹽緩沖液，同時添加 Tissue Transglutaminase。每孔總體積為 200 μL，在 37°C、5% CO2 和濕潤的空氣中孵育 5 天。 (2) 向每孔中加入 1 微居里的 3H-胸腺嘧啶。再繼續孵育 18 小時后，使用細胞收集器和放射性計數器測量 DNA 中的 3H摻入量。結果以測試樣本的每分鐘計數 (c.p.m.) 表示。 Tissue Transglutaminase 用于 HLA II 類限制性實驗[4] (1) 麥醇溶蛋白 (100 mg/ml) 用α-胰凝乳蛋白酶 (重量比 200:1) 在室溫下于 0.1 M 碳酸氫銨和 2 M 尿素中進行消化。 (2) 消化過程持續 24 小時后，通過將樣品加熱至 98℃ 10 分鐘來終止反應。 (3) 樣品以 13,000 g 離心 10 分鐘后，收集上清液，并使用 0.2 微米濾膜進行無菌過濾。 (4) 通過 SDS-PAGE 驗證麥醇溶蛋白的消化情況，并測定蛋白質濃度。 (5) 將麥醇溶蛋白 (640 µg/mL) 和合成的麥醇溶蛋白肽段 (15 個氨基酸的肽段: 160 µg/mL，其他肽段: 0.1 mM) 分別與 α-胰凝乳蛋白酶消化后的產物一起，在 37℃ 下用 50 µg/mL 的 Tissue Transglutaminase 在含有 1 mM CaCl2 的 PBS 緩沖液中處理 2 小時。 (6) 處理后的肽段和肽段混合物被分裝到無菌的 96 孔板中，并在 -20℃ 下冷凍保存。 (7) 將抗 CD4 或 CD8 抗體的磁珠用RPMI培養基清洗四次。并與 5×106 PBMC 細胞一起在冰上孵育 30 min。 (8) 移除磁珠，并進行細胞計數。 (9) 將 5×106 PBMC 細胞與針對 HLA-DR (L243)、HLA-DQ (L2) 和 HLA-DP (B7.21) 的單克隆抗體 (各 10 μg/mL) 在室溫下預孵育 1 小時。 (10) 隨后加入肽段，使用 ELISPOT 方法檢測 IFN-γ 的分泌量，評估 T 細胞對肽段的反應。 MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Kieliszek M, Misiewicz A. Microbial transglutaminase and its application in the food industry. A review. Folia Microbiol (Praha). 2014 May;59(3):241-50.
[2]. Pavel Strop, et al. Versatility of microbial transglutaminase. Bioconjug Chem. 2014 May 21;25(5):855-62.
[3]. Anna Bérot, et al. Generation of Anti-Epidermal Growth Factor Receptor?2 (HER2).ACS Pharmacology & Translational Science.2024 American Chemical Society  
[4]. R P Anderson, et al. In vivo antigen challenge in celiac disease identifies a single transglutaminase-modified peptide as the dominant A-gliadin T-cell epitope. Nat Med. 2000 Mar;6(3):337-42.