Reverse Transcriptase
MCE 國際站：Reverse Transcriptase
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20°C，1 年
簡介：Reverse Transcriptase是通過基因重組技術克隆表達M-MuLV的缺失突變型RNase H-的反轉錄酶。
概述：Reverse Transcriptase是通過基因重組技術克隆表達M-MuLV的缺失突變型RNase H-的反轉錄酶。一般的野生型M-MuLV(Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：1)依賴于RNA的DNA聚合酶活性；2)依賴于DNA的DNA聚合酶活性；3)RNase H活性。由于RNase H能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應中可能會降解RNA/DNA雜合體中的模板RNA。本酶的RNase H活性缺失，延伸能力強，可用于較長的cDNA合成，高比例的全長cDNA文庫的構建以及Real Time RT-PCR反應等。
描述：
該酶缺乏RNase H活性，延伸能力強，可用于較長cDNA合成、高比例全長cDNA文庫構建、Real Time RT-PCR反應等。
操作說明：cDNA第一鏈合成反應體系1) 試劑融化后，將試劑盒中各組分混勻并稍微離心后置于冰上。2) 按順序加入以下反應物：3) 如果RNA模板GC含量高或者含有二級結構，可先將RNA模板和Water(RNase-Free)混勻后，65℃孵育5min，冰上冷卻，再加入其它組分。4) 3) 輕輕混勻，離心。42℃孵育15-30min。如果RNA模板中不含poly A結構，25℃先孵育5min，隨后42℃孵育15-30min。反應產物可直接用于PCR，如果不立即使用，-20℃保存少于一周，長時間保存建議-70℃放置。注意：有實驗結果提示，本反轉錄酶可在15min內完成1kb反轉錄反應。
注意事項：1. 用DEPC處理實驗用到的所有實驗器材，或者購買已經證明無核酸酶的實驗用具，實驗過程戴手套并經常更換手套，避免RNA酶的污染。2. 確保所用試劑及超純水中無RNA酶污染。3. 純化過的RNA必須保證不含有鹽，金屬離子，乙醇和苯酚，以上成分會干擾第 鏈cDNA的合成反應。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。4. 為保證反轉錄反應的有效進行，需使用高質量的RNA模板。5. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴 次性手套操作。
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