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當前位置:> 供求商機> 大鼠嘔吐毒素(DON)ELISA快速檢測試劑盒
大鼠嘔吐毒素(DON)ELISA快速檢測試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被嘔吐毒素(DON)抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的嘔吐毒素(DON)呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
大鼠嘔吐毒素(DON)ELISA快速檢測試劑盒組成:
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
競爭抗原-HRP | 6mL | 3mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、1.25、2.5、5、10、20 ppb
結(jié)果判斷
1. 15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
2. 百分結(jié)合率計算:設(shè)S0管計數(shù)為B0,各標準管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%
3. logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)
4. 將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除,為標準點的百分結(jié)合率,在log-logit坐標紙上繪圖。
5. Log-logit雙對數(shù)標準曲線:坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位,第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比(1-99),即各標準吸光值的百分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率,再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點,此點對應(yīng)的橫坐標濃度即為樣品的濃度,無須換算。
6. 人工處理:以標準濃度取log值為橫坐標,對應(yīng)的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應(yīng)的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據(jù)待測樣
品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙,查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度值。
7. 自動處理:使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式,由電腦自動計算得出結(jié)果。
8. 敏感度:0.25 ppb
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