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佰利萊生物教您選購大鼠ELISA試劑盒后需注意哪些

時間:2023/3/28閱讀:510
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大鼠ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。

大鼠ELISA試劑盒選購后需注意哪些:
1.檢查檢查說明書、包裝盒的質(zhì)量,通常偽劣產(chǎn)品為了降低成本,印刷的質(zhì)量會比較差。其次仔細(xì)閱讀說明書,如上所示查找ELISA的性能指標(biāo)。


2.實驗
(1)利用干擾實驗即可鑒別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原a. 將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液;b. 37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測抗體;c. 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物;d. 實驗完畢后,檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,該試劑盒為假貨ELISA試劑盒;e. 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明試劑盒檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實際試劑盒抗體的檢測作用,則該試劑盒檢測抗體針對的是目的抗原。


(2)如果購買了兩盒同一公司的ELISA試劑盒A和B,利用交叉實驗即可鑒別ELISA試劑盒是否造假a. 取出購買的試劑盒A的包被板兩條;b. 一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;c. 另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;d. 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物;e. 實驗完畢后,檢測兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說明兩個ELISA試劑盒檢測的同一個指標(biāo)而非A和B,即該試劑盒為假貨ELISA試劑盒;f. 如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說明兩個ELISA試劑盒檢測的不同指標(biāo),試劑盒A只能檢測A,不能檢測B,即該試劑盒為正常的ELISA試劑盒


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