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液相分析中如何選擇液相色譜柱
伴隨色譜技術的突飛猛進，色譜柱層出不窮，C18鍵合填料是否封尾、雜化官能團的鍵合、高強度硅膠的使用······色譜柱的填料沒有成千，也有上百。到底該如何選擇等效柱呢？我們憑什么說這兩根柱子是等效的?？梢哉f，色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分，相當于人體的“心臟"。根據自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱，需要考慮不同參數將會造成什么影響。比如色譜柱尺寸：柱長、內徑；色譜柱填料：粒徑、孔徑、比表面積、基質及其表面特征、載碳量鍵合相類型。
查詢USP
如果藥物在USP中有收載，可以利用USP直接進行查： 數據庫如下：直接點擊標紅下拉列表，簡單選擇一款色譜柱，以Zorbax Eclipse XDB C18為例。
網頁會自動根據色譜柱的相似性生成列表 其中F表示代表色譜柱比對函數，值越低代表相似性越好。那么，列表上方的Hy、CTF、CFA、TFA、BD分別代表什么意思呢？首先這些參數是USP方法中常使用的
在日常液相分析中，正確選擇適合自己實驗的色譜柱，將會使得你的實驗事半功倍！
色譜柱參數--- 柱長
兩支同填料的色譜柱，柱長越長，分離時間越長，但柱越長分離度將會更好，同時柱壓也將更大，可結合樣品的復雜性和希望的分離時間來選擇合適的柱長，一般為2.0~250mm。
色譜柱參數--- 內徑
窄徑柱可提高柱的靈敏度，并可明顯降低溶劑的使用量；
寬徑柱可以將系統死體積的影響降到zui低，載樣量高，抗污染。
色譜柱參數--- 粒徑
例如：1.8μm、3μm、5μm、10μm等，粒徑越小，分離越快，柱效越高。但柱壓力越高，柱容易被污染，壽命低。
色譜柱參數--- 孔徑
孔徑小，含孔率高，則比表面積大，載碳量高。
色譜柱參數--- 比表面積
例如：180㎡/g、320㎡/g等（Ultimate系列為320㎡/g），選擇適合目標物的比表面積，每克填料的表面積（與粒度、含孔率有關)，比表面積大，會增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保留、載樣量增加,比表面積小可以縮短分析時間和梯度時的平衡時間。
色譜柱參數--- 載碳量
例如：10%、14%、17%、23%等，載碳量通常影響選擇性。硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積，鍵合覆蓋度等有關。載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。制備色譜的上樣量也可以增加。
色譜柱參數--- 硅膠基質
1. 硅膠基質色譜柱較其他材料制成的柱子有更高的柱效；
2. 硅膠機械強度好；
3. 硅膠表面可化學修飾制成具有各種官能團的鍵合相；
4. 硅膠填料不會發生體積的變化；
5. 硅膠在高pH值下會溶解；
6. 硅膠表面酸性，在分離堿性化合物時容易產生拖尾。
色譜柱參數--- 聚合物基質填料
1. 交聯苯乙烯/二乙烯基苯、甲ji苯烯酸酯等；
2. pH穩定性好：pH1-14；
3. 可以在很寬的范圍內進行表面化學處理以滿足反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜和體積排阻色譜的需求；
4. 在中等pH條件下對強堿性物質具有更好的峰形；
5. 填料的體積隨著流動相的不同而改變，如膨脹或收縮；
6. 分離效率相對硅膠而言比較低；
7. 重現性不好；
8. 機械強度差。
色譜柱參數 --- 硅醇基
硅醇基的酸性較大，可與堿性化合物由于靜電作用力而牢固的結合，因此含有較多殘留硅醇基的填料在分離堿性化合物時容易產生拖尾、變寬、保留延長等現象。
如何屏蔽剩余硅羥基的影響：加入適當的掃尾劑如三乙胺可以掩蔽殘留的硅羥基，使堿性化合物峰形變好；降低流動相pH值小于3，可以減小硅醇基的反應，從而減小拖尾現象。或者選擇優先使用雙封尾的色譜柱。
色譜柱參數 --- 封尾
為了降低硅醇基的影響，需要對色譜柱進行封尾，通常為鍵合填料與小硅烷（如：三甲基硅烷）進行后續反應，屏蔽掉部分殘留硅醇基。
封尾的目的：1.屏蔽殘留的硅醇基；2.改善選擇性。
色譜柱參數 --- 鍵合相的分類
鍵合相：反相（70%）；C18（65%）；C8（15%）；Cyano（5%）；苯基柱（<5%）；正相（20%；硅膠、-NH2、-CN）；其它（10% ；手性柱、離子交換柱）。
同一廠家相同硅膠基質的反相柱：保留值隨著碳載量的增加而增加；鍵合碳鏈越長，保留越大，C18≈C8＞C4＞C1，長鏈之間差異不大，根據待分析物質的性質，選擇合適的鍵合相和分離模式。