1. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

2. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

3. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

4. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

5. 溫育：操作同3。

6. 洗滌：操作同5。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。