酶聯(lián)免疫吸附測定法

1971年瑞典學(xué)者Engvall和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。

中文名

酶聯(lián)免疫吸附測定法

外文名

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA

別名

ELISA法

發(fā)現(xiàn)者

Van Weerman

原理

抗體與酶復(fù)合物結(jié)合顯色

酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)檢測hbsag因具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，但在日常工作中檢測hbsag常遇到假陽性率高、重復(fù)性不好的現(xiàn)象。hbsag假陽性結(jié)果易給廣大體檢人員造成大的精神壓力，易引起體檢人員對檢測人員的投訴，同時(shí)對檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)易造成不良的聲譽(yù)[1]。針對這一現(xiàn)象，為了使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確、假陽性率更低，筆者采用同一種試劑對不同的血清標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)測定分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 血清標(biāo)本采靜脈血做乙肝兩對半的血清標(biāo)本均來自來我院進(jìn)行單位職工年度體格檢查。

1．2 試劑和儀器上海科華生物工程有限公司生產(chǎn)的乙肝hbsag酶聯(lián)免疫試劑盒，深圳雷杜酶標(biāo)儀和洗板機(jī)。

1．3 分組和檢測方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，在操作過程中，小心吸取血清，避免人為造成影響[2]。分3類情況進(jìn)行觀察。a組：不抗凝血液標(biāo)本：取96份不抗凝血液標(biāo)本，每份分為三管，分別靜置0．5、1、2 h后用3 000r／min離心l5 min，取出血清分別檢測hbsag。b組：加抗凝劑標(biāo)本：采集50份靜脈血標(biāo)本，每份標(biāo)本分別用不抗凝管、肝素鈉抗凝管、edta一2ka管、枸櫞酸鈉管這4種管各裝l管，其中不抗凝標(biāo)本靜置2 h后3 000 r／min離心15 min，另3管靜置2 h析出血漿。c組：含血細(xì)胞標(biāo)本：從體檢人員中抽出45例健康人血液標(biāo)本(hbsag陰性者)。取45份血清和血細(xì)胞每份血清1．2 ml，血細(xì)胞0．2ml。把0．2 ml的血細(xì)胞加生理鹽水，校正紅細(xì)胞計(jì)數(shù)為1．0×10  12 l  -1 ，然后按表1進(jìn)行稀釋制成含有不同血細(xì)胞的血清標(biāo)本，然后對含有不同濃度血細(xì)胞的標(biāo)本進(jìn)行hbsag的檢測。