ATCC培養(yǎng)基是微生物培養(yǎng)中常用的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基，其操作需嚴(yán)格遵循規(guī)范，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。以下是操作時的關(guān)鍵注意事項：
一、培養(yǎng)基的選擇與配制
1.明確培養(yǎng)基類型
根據(jù)微生物種類和實驗?zāi)康倪x擇合適的ATCC培養(yǎng)基配方。
注意培養(yǎng)基的pH值、滲透壓和營養(yǎng)成分是否符合目標(biāo)微生物的需求。
2.嚴(yán)格按配方配制
使用精確的電子天平稱量試劑，避免稱量誤差。
溶解試劑時充分?jǐn)嚢瑁_保完*溶解。
調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定范圍，避免過酸或過堿。
3.滅菌處理
液體培養(yǎng)基需高壓滅菌，固體培養(yǎng)基需先滅菌后倒平板。
滅菌后立即使用或在無菌條件下保存，避免污染。
二、ATCC培養(yǎng)基操作注意事項：
1.無菌操作
在超凈工作臺或生物安全柜中進(jìn)行接種、倒平板等操作，避免雜菌污染。
使用無菌器械，每次使用前需灼燒滅菌。
操作過程中避免說話、咳嗽或大幅移動，減少空氣流動導(dǎo)致的污染。
2.接種規(guī)范
接種前確保微生物培養(yǎng)物處于對數(shù)生長期或適宜階段。
控制接種量，避免過量導(dǎo)致菌落重疊或過少導(dǎo)致生長不良。
涂布平板時用力均勻，確保菌液均勻分布。
3.培養(yǎng)條件控制
根據(jù)微生物需求設(shè)置溫度、氣體環(huán)境和濕度。
倒置培養(yǎng)平板，避免冷凝水滴落沖散菌落。
三、ATCC培養(yǎng)基儲存與有效期：
1.儲存條件
未開封的培養(yǎng)基應(yīng)存放在陰涼干燥處，避免光照和高溫。
已配制的培養(yǎng)基需密封保存，防止吸潮或污染。
2.有效期管理
固體培養(yǎng)基平板應(yīng)在4℃保存，最好在24~48小時內(nèi)使用，避免干燥或污染。
液體培養(yǎng)基開封后需盡快使用，避免變質(zhì)。
四、常見問題與解決
1.污染問題
若培養(yǎng)基出現(xiàn)霉菌、雜菌斑點(diǎn)，需檢查無菌操作是否規(guī)范，器械是否滅菌徹*。
定期清潔超凈工作臺和實驗區(qū)域，使用消毒劑（如70%乙醇）擦拭臺面。
2.菌落異常
菌落形態(tài)、大小不一致：可能因接種量不均或培養(yǎng)基pH偏差，需重新配制培養(yǎng)基并規(guī)范操作。
菌落稀少或無生長：檢查培養(yǎng)基配方、滅菌是否充分、微生物活性是否良好。
3.培養(yǎng)基干裂
固體培養(yǎng)基平板在長期培養(yǎng)后可能干裂，可通過加蓋保濕或縮短培養(yǎng)時間改善。
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