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1. 檢查取樣室內門并關緊;
2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門;
3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。第二次重復操作一次。第三次操作時，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數;
5. 取樣室外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗；
6.混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。
厭氧培養箱長期使用的條件:
1.每天在操作室內打開美蘭指示紙觀察，如不正常就必須重新換氣;
2.要長期連續輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內厭氧狀態，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
3. 連續培養運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。